具杀褐飞虱活性银杏内生真菌筛选及培养条件优化

摘要

银杏（Ginkgo biloba）甲醇提取物具有杀褐飞虱活性，目前已从中发现银杏内酯类及另有一些银杏糖甙类化合物具有直接毒杀或增效作用。但是直接从银杏中提取活性化合物工艺复杂且成本较高，为更好地开发利用银杏活性物质，本实验通过对银杏根部内生菌进行液态培养发酵，然后浓缩提取银杏内生菌次生代谢产物，进行杀虫活性的定向筛选，为实验室进一步分离具有杀虫活性的单体化合物提供材料。
　　本实验将从银杏根部分离到的真菌进行初步形态鉴定、排重，将筛选范围缩小到31株内生真菌，其中一株菌株Y-22具有较好的杀虫活性，通过点滴法测定对褐飞虱的触杀毒力，该菌株发酵液的乙酸乙酯萃提物处理褐飞虱的 LC50达24 mg/mL。
　　通过对菌株Y-22进行形态学和分子鉴定，鉴定结果表明，Y-22菌株的ITS DNA序列与Penicillium sp. C1 HC-2011 HQ668177.1相似性达87%，初步鉴定该菌株为青霉菌属，并构建系统发育树研究其种属地位。
　　通过对菌株Y-22进行优化培养，在维持该菌株的乙酸乙酯萃提物杀虫活性基本稳定的情况下，提高发酵液乙酸乙酯萃提物的产量：①发酵培养基组分组成为：马铃薯240 g/L、葡萄糖33 g/L、硝酸钾1.51g/L时，提取到最大萃物量0.345 g/L。②培养条件为发酵温度约34℃、摇床转速约为150 r/min、发酵时间7 d时，提取到最大萃物量0.301 g/L。

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1 引言

1.1 褐飞虱的危害与防治研究

1.2 植物内生菌概述

1.3 植物内生菌生物活性研究进展

1.4内生菌代谢产物检测方法概述

1.5银杏内生真菌的次生代谢产物及其活性研究进展

1.6 响应曲面设计方法在发酵培养优化中的应用

1.7本研究的目的及意义

2 实验材料与方法

2.1 实验仪器与材料

2.2 实验方法

3 实验结果与讨论

3.1 银杏根内生真菌分离及部分内生真菌活性测试

3.2 银杏根内生真菌杀褐飞虱活性初筛

3.3 菌株Y?22对褐飞虱的毒杀作用

3.4小室培养法观察活性菌株形态特征

3.5菌株Y?22的 ITS序列鉴定

3.6 发酵培养基的选择

3.7 发酵培养条件的优化

4小结与展望

4.1 活性菌株的分离与筛选

4.2发酵培养条件优化

4.3真菌菌株的分类鉴定

4.4展望

参考文献

致谢