臭椿抗T MV活性内生真菌的筛选、鉴定及发酵条件优化

摘要

植物病毒病是一类危害农业生产的重要病害，迄今为止，尚无一种化学药剂能够彻底的控制植物病毒病。基于植物内生真菌能够产生与宿主植物相同或相似成分的代谢产物的理论，本论文以臭椿为材料，对其内生真菌进行分离，将分离到的内生真菌进行抗烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）活性的测定，筛选出具较强抗TMV活性的菌株，并对活性菌株进行鉴定和发酵条件的优化，为新型抗植物病毒剂的开发和应用奠定基础，现将主要研究结果总结如下：
　　采用组织块分离法从臭椿的根、枝条和叶中共分离出107株内生真菌，其中从根中分离到30株，枝中26株，叶中51株，分离结果表明，臭椿叶中分布的内生真菌较多，根和茎中较少。
　　采用叶碟法对分离出的臭椿内生真菌的发酵液提取物进行抗TMV增殖活性筛选，结果表明，在供试的107株内生真菌中，有四株内生真菌AL14、AL45、AT12和AT25对TMV增殖的抑制率均在80％以上，选取这4株抑制率较高的内生真菌重新发酵，测定其发酵液提取物在不同浓度条件下对TMV增殖的抑制率，结果显示，只有菌株AL14对TMV增殖的抑制作用较稳定，且在较低浓度时抑制率也较高。用半叶枯斑法对上述4株内生真菌抗TMV侵染作用进行检测，结果表明，四株内生真菌的发酵液提取物均具有较好的抗TMV侵染作用，其中以AL14的抑制作用最强，在1 mg/mL时抑制率可达93.88%。上述结果表明，菌株AL14具有较好的抑制TMV增殖和侵染的活性，具有潜在的应用价值。
　　在形态学鉴定的基础上，通过对菌株AL14的ITS区段序列进行分析，确定菌株AL14的分类地位为：半知菌类（Imperfecti fungi）、丝孢纲（Hyphomycetes）、丝孢目（Moniliales）、暗色孢科（Dematiaceae）、链格孢属（Alternaria）、链格孢（Alternaria alternata）。
　　采用单因素优化试验和正交试验的方法，对菌株AL14的培养基和发酵条件进行优化，确定最适菌株AL14生长的固体培养基为沙氏培养基，最佳液体发酵培养基为：含有葡萄糖4.0%、硫酸铵1.0%，CaCO30.3%、FeSO40.02%的马铃薯汁液培养基；最佳发酵条件为：发酵温度28℃、初始pH7.5、发酵时间9d、接种量5%、转速120 r/min。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

1 文献综述

1.1 烟草花叶病毒病的危害及其防治研究概况

1.2 微生物源抗植物病毒活性物质的研究概况

1.3 植物内生真菌的研究概况

2 臭椿内生真菌的分离、纯化及保存

2.1实验材料

2.2 试验方法

2.3 结果与分析

2.4 小结与讨论

3 臭椿内生真菌代谢产物抗病毒活性筛选

3.1 实验材料

3.2 试验方法

3.3 结果与分析

3.4 小结与讨论

4 内生真菌AL14的鉴定

4.1 实验材料

4.2 实验方法

6.5μL

5.2～4循环30次

4.3 结果与分析

4.4 小结与讨论

5 菌株AL14培养基及发酵条件的优化

5.1 实验材料

5.2 试验方法

5.3 结果与分析

5.4 小结与讨论

参考文献

致谢