人特异性抗蛋白酶性保护因子Elafin的克隆及真核表达载体pEGFP-N1-elafin的构建及在肺上皮细胞中的表达

摘要

本文目的是克隆人特异性抗蛋白酶保护因子Elafin基因eDNA，构建该基因的真核表达载体；观察其在肺上皮细胞中的表达情况，为研究Elafin作为天然内生抗菌多肽的应用提供技术基础。本文首先抽提人肺总RNA进行逆转录反应，经PCR扩增目的片段，将其克隆于pUCm-T载体上，经酶切电泳、DNA测序鉴定分析。然后将pEGFP-N1-elafin转染到肺上皮细胞A549中，荧光显微镜观察其在细胞中表达及定位，并采用特异的cRNA探针和抗Elafi n单抗行Northern杂交和ELISA检测，分别从转录及蛋白质水平来分析其表达情况。结果指出获得编码Elafin的基因片段，并成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-elafin。在其转染的肺上皮细胞中有Elafin基因表达，且证实其主要是由培养细胞呈分泌性表达。

目录

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符号说明

摘要

前言

第一部分Elafin cDNA的克隆、测序鉴定

材料与方法

结果

讨论

第二部分pEGFP-N1-elafin表达载体的构建及其在肺上皮细胞中的表达

材料与方法

结果

讨论

参考文献

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致谢

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