1.轻度认知功能障碍与阿尔茨海默病临床综合性评价的对照研究;2.Alzheimer病大鼠脑内突触功能障碍分子生物学机制及干预的实验研究

摘要

目的：观察MCI、AD及CN各组在SPECT rCBF、P300与MMSE评分等临床综合性评定的不同表现及特点，同时检测以上各组脑脊液中GAP-43、Aβ1-42生化指标含量的变化，以期为进一步阐明MCI的临床特点及其防治提供理论依据，进而提高AD早期诊断的特异性和敏感性。 方法：入选2006-01～2007-12重庆医科大学附属第二医院神经内科门诊或住院的MCI组36例，AD组25例，CN组30例。很可能AD的纳入标准采用美国国立神经病、语言障碍和卒中研究院-阿尔茨海默病和相关疾病学会的诊断标准；MCI组的纳入标准：采用Petersen等制定的标准；CN的纳入标准：为同期本科的住院人员并除外可能影响认知功能的神经系统疾病。所有入选病例均获得本人和(或)法定监护人同意。神经心理学检查采用MMSE。经常规腰椎穿刺术取CSF约3ml，立即储存于-70℃冰箱待测。应用肌电-诱发电位仪的听觉oddball程序检测P300。进行SPECT局部脑血流灌注显像，半定量分析各脑区血流灌注情况。 用酶联免疫吸附试验测定各组CSF中GAP-43、Aβ1-42含量并比较。结果：(1)本实验入选者其性别、平均年龄、文化程度的构成，经统计学检验无显著性差异；与CN组及MCI组相比，AD组MMSE评分显著降低；与CN组相比，MCI组MMSE评分明显降低。(2)与CN组相比，MCI组与AD组P300潜伏期均有不同程度的延长；同MCI组和CN组相比，AD组P300波幅显著降低；P300波幅在MCI组与CN组之间差异无显著性。(3)AD组在双侧额叶、项叶、颞叶、海马、左侧丘脑及扣带回RAR均较CN组有不同程度降低；MCI组仅在双侧颞叶、左侧海马及扣带回RAR减低具有统计学意义，且扣带回下降更明显。(4)AD组CSF中GAP-43含量明显高于CN组及MCI组，MCI组同CN组相比虽有所增高，但无显著意义。AD及MCI组CSF中Aβ1-42浓度同CN组相比均不同程度降低，且AD组降低更显著。 结论：(1)SPECT检测在双侧颞叶、扣带回及左侧海马区rCBF显著降低可作为预测CN到MCI转化的灵敏指标；并可在一定程度上客观地反映AD、MCI及CN组之间的动态变化以及认知损害的严重程度。(2)对认知功能损害的监测，P300潜伏期的延长早于波幅的降低，是反映AD患者亚临床认知功能损害的敏感指标。检测P300潜伏期对早期发现AD可能有一定价值并可作为观察疗效的一个客观指标。(3)CSF中Aβ1-42、GAP-43的含量变化在一定程度上反映了从正常认知进展到MCI及AD的不同病理进程，可作为提高早期AD预测的生物学标志之一，而且可对治疗效果进行监测。(4)MMSE、rCBF、P300以及CSF中Aβ1-42、GAP-43的含量检查对于MCI、痴呆的早期诊断和客观反映痴呆严重程度具有重要价值，而不同指标的联用可提高AD的早期诊断。目的：观察地黄益知浸膏(DiHuang YiZhi JinGao，DHYZJG)对老年性痴呆(Alzheimer’s Disease，AD)大鼠学习记忆能力及中枢胆碱能系统及其信号转导通路功能紊乱、突触可塑性的影响，探索其防治AD的可能机制，并为其治疗AD提供实验室依据。 方法：(1)DHYZJG由熟地黄、山茱萸、石菖蒲、远志、巴戟天等8味中药组成，在重庆中药研究院制成中药流浸膏(1g流浸膏相当于2g生药含量)。动物实验前对DHYZJG生行了急性毒理实验。(2)将90只雄性SD大鼠随机分为6组，右侧海马注射Aβ25-35造成AD模型，用电脑控制的穿梭箱及水迷宫检测大鼠的学习记忆能力。(3)通过苏木精伊红、尼氏染色，观察各组大鼠海马CA1区的病理学变化。(4)应用Hestrin碱性羟胺比色法检测Ach的含量；应用微量羟胺比色法测定AChE活性；应用RT-PCR法检测M-AchR M1、N-AchR a4、a7mRNA的表达水平；应用Western-blot法测定CREB、GSK-3β的蛋白磷酸化水平。并以Donepezil为对照，探讨DHYZJG的治疗效果及其作用机理。(5)应用免疫荧光技术，采用激光共聚焦扫描仪检测AD大鼠海马CA1区GAP-43、PSD-95的表达；应用电镜和图象分析系统测量AD大鼠海马CA1区突触界面结构参数(突触数密度、突触后膜致密物厚度、突触活性区长度、突触界面曲率)；并观察DHYZJG对AD大鼠海马突触可塑性的影响。结果：(1)在治疗4周后：Model组大鼠穿梭箱及水迷宫测试出现学习、记忆能力下降，DHYZJG可剂量依赖性的改善Model组大鼠的学习、记忆能力。(2)在治疗4周后：HE和尼氏染色显示，与Sham组相比，Model组大鼠右侧海马CA1区细胞脱失明显，出现核深染、固缩，胞浆内尼氏小体模糊不清或消失；DHYZJG High、Medium组神经细胞排列较整齐、结构较完整，神经元变性、坏死程度均较Model组轻。Nissl染色后，Model组大鼠右侧海马CA1区细胞数同Sham组相比显著减少，而DHYZJG High、Medium组则显著增多，并呈剂量依赖性。(3)在治疗4周后：与Sham组相比，Model组大鼠右侧海马Ach含量、AChE活性显著降低；与Model组相比，DHYZJG High、Medium组Ach含量不同程度的升高，AchE酶活性显著上调。(4)在治疗4周后：与Sham组相比，Model组大鼠右侧海马pCREB Ser133和pGSK-3βSer9蛋白表达显著降低，CREB和GSK-3β蛋白表达无明显下降；与Model组相比，DHYZJG High组大鼠右侧海马pCREBSer133和pGSK-3βSer9蛋白含量均不同程度增高，但GSK-3β蛋白表达明显下降。(5)在治疗4周后：与Sham组相比，Model组大鼠右侧海马N-AchR a7 mRNA含量明显增高，M-AchR M1、N-AchR a4 mRNA表达无显著差异；与Model组相比，DHYZJG High组大鼠右侧海马M-AchR M1、N-AchR a7 mRNA表达水平均明显增高。(6)在治疗4周后：同Sham组相比，Model组大鼠右侧海马CA1区神经元突触Nv、PSD的厚度、突触活性区长度均显著下降，PSD-95表达显著降低，GAP-43表达明显增高；DHYZJG High组大鼠右侧海马CA1区神经元突触的Nv、PSD的厚度、突触活性区长度显著恢复，PSD-95、GAP-43的荧光强度比Model组均有不同程度增高，突触界面曲率各组间无显著差异。结论：(1)DHYZJG可剂量依赖性的改善AD大鼠学习记忆等认知功能障碍；(2)DHYZJG能剂量依赖性的减轻AD大鼠海马区的神经元坏死和凋亡程度，从而发挥神经保护作用；(3)AD大鼠可能是由于中枢胆碱能系统功能整体水平受损而使其失代偿；DHYZJG可剂量依赖性的改善AD大鼠中枢胆碱能系统的功能紊乱，使其达到新的动态平衡，也体现了中药的多靶点、整体调整特点；(4)AD组大鼠海马突触传递功能受阻，神经元间的信息传递、加工和储存受障，而DHYZJG可促进突触重构，调节突触可塑性，改善AD海马受损神经元轴突的生长和促进中枢神经系统反应性功能重建，最终改善认知功能障碍。

目录

论文说明：英汉缩略语名词对照

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摘要

第一部分 轻度认知功能障碍与阿尔茨海默病临床综合性评价的对照研究

前言

1对象和方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

第二部分 Alzheimer病大鼠脑内突触功能障碍分子生物学机制及干预的实验研究

前言

1材料和方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

论文图片资料

文献综述一 老年性痴呆中枢胆碱能系统研究进展

文献综述二 突触可塑性及其相关蛋白与老年性痴呆的研究进展

致谢

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