环孢菌素A血药浓度快速检测试纸的初步研制及验证

摘要

第一部分：
　　 目的：制备环孢菌素A人工抗原,考察其相关特性。
　　 方法：在环孢菌素A上连接化学活性基团,再与载体蛋白(牛血清白蛋白)偶联合成环孢菌素A人工抗原；用透析法纯化人工抗原；紫外扫描和SDS-PAGE鉴定偶联结果,计算环孢菌素A与载体蛋白的偶联比。
　　 结果：制备出环孢菌素A人工抗原,紫外扫描和SDS-PAGE均显示环孢菌素A与载体蛋白偶联成功,环孢菌素A与载体蛋白的偶联比为18.3:1。
　　 结论：成功制备出纯化环孢菌素A人工抗原。
　　 第二部分：
　　 目的：制备环孢菌素A多克隆抗体,并考察环孢菌素A多克隆抗体的相关特性。
　　 方法：用环孢菌素A人工抗原多次免疫动物,获得抗血清；盐析法纯化抗体；间接ELISA法测定抗体效价；IC50评价该抗体的特异性；考马斯亮蓝G-250法测定抗体的蛋白浓度。
　　 结果：经5次免疫后获得环孢菌素A抗血清,抗体效价为1:16000；所得抗体与阿奇霉素,兰索拉唑,头孢拉定,氨溴索,格列本脲无明显交叉反应,纯化后的抗体蛋白浓度为1.367mg/ml。
　　 结论：制备出纯化环孢菌素A多克隆抗体。
　　 第二部分：
　　 目的：制备环孢菌素A血药浓度快速检测试纸,考察试纸的相关特性,将试纸测定结果与TDX测定结果进行统计学比较,评价试纸的临床使用价值。
　　 方法：将胶体金标记的环孢菌素A多克隆抗体,吸附在玻璃纤维素膜上,将人工抗原固化于适合的硝酸纤维素膜上,组装成检测试纸,优化工艺参数。考察试纸的灵敏度,精密度,检测范围,最低检测限,工作标准曲线,稳定性等指标。将试纸测定结果与TDX测得的结果进行比较,并做统计学分析。
　　 结果：试纸对血清中环孢菌素A的检测范围为5-600ng/ml,标准曲线方程为A=-0.1903C+143.69,日内、日间精密度均小于25％,与阿奇霉素,兰索拉唑,头孢拉定,氨溴索,格列本脲无明显交叉反应。检测试纸检测结果与TDX检测结果间无显著差异(P>0.05)。
　　 结论：初步研制出环孢菌素A血药浓度快速检测试纸,但其制备工艺及各项参数仍需要进一步研究和完善。