核心蛋白聚糖对胃癌细胞SGC-7901分子生物学行为的影响

摘要

目的:构建人核心蛋白聚糖(decorin,DCN)真核表达载体,通过脂质体介导的方法,将真核表达载体转染入胃癌细胞SGC-7901中,研究其对胃癌细胞增殖、周期、凋亡、迁移、侵袭等方面的影响,从而阐述DCN的抗肿瘤作用机制。
　　 方法:(1)从人胎盘组织中提取总RNA,通过RT-PCR的方法获得人DCN基因,并将目的基因克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,命名为pEGFP-N1-DCN,酶切、PCR及送检测序鉴定真核表达载体是否构建成功。(2)将pEGFP-N1-DCN转染胃癌细胞SGC-7901,通过荧光显微镜检测其表达,并通过RT-PCR和Western blot检测DCN、TGF-β1和EGFR基因转录及蛋白表达。(3)通过MTT检测细胞生长;流式细胞仪分析SGC-7901细胞周期变化及凋亡。(4)Transwell迁移试验验证DCN对SGC-7901迁移能力以及Transwell侵袭试验验证DCN对SGC-7901侵袭能力的影响。
　　 结果:(1)通过RT-PCR方法克隆人DCN基因,其大小为1080bp,与目的基因片段大小一致;pEGFP-N1-DCN双酶切及PCR鉴定表明DCN成功克隆到真核表达载体上,测序结果显示所测结果与目的基因序列同源性100％。(2)转染pEGFP-N1-DCN后的SGC-7901细胞,通过荧光显微镜可观察到绿色荧光的表达;RT-PCR结果显示DCN mRNA转录明显增高;Western blot结果显示有DCN基因的表达,其融合蛋白的分子量约为67×103(绿色荧光蛋白分子量约为27×103)。转染pEGFP-N1-DCN后的SGC-7901细胞,RT-PCR及Western blot检测TGF-β1和EGFR的表达均降低。(3)细胞增殖受到明显抑制,细胞周期停滞在G0～G1期,凋亡增加。(4)胃癌细胞迁移及侵袭能力减弱。
　　 结论:转染pEGFP-N1-DCN的胃癌细胞SGC-7901,细胞增殖受到明显抑制,细胞周期阻滞在G0～G1期,凋亡增加,迁移和侵袭能力减弱,由此可见,DCN通过抑制细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡等机制达到抑制肿瘤的作用。