通过exosomes途径分泌的hepaCAM蛋白对肾癌细胞增殖的影响

摘要

背景：HepaCAM(hepatocyte cell adhesion molecule，肝细胞粘附分子)是由新加坡沈莎莉教授2004年发现的一种新基因，它是一个典型的跨膜粘附分子。Exosomes是由包括肿瘤细胞在内的活细胞释放的直径在30～100nm之间富含母体细胞的大量蛋白、RNA等物质的小囊泡。肿瘤细胞内存在大量肿瘤相关蛋白，对肿瘤细胞的发生发展起着重要的作用，最新研究发现肿瘤细胞可以通过exosomes通路分泌多种蛋白，如HSP60、HSP70，是细胞内蛋白质分泌的方式之一。但hepaCAM蛋白是否可以通过exosomes途径分泌及其细胞外作用尚无具体研究。
　　目的：探讨hepaCAM腺病毒质粒转染肾癌786-0细胞后，hepaCAM蛋白在786-0细胞中是否通过exosome途径分泌及该途径分泌的hepaCAM是否可以抑制肾癌细胞增殖。
　　材料与方法：将携带hepaCAM基因的重组腺病毒质粒瞬时转染786-0细胞，以转染空载腺病毒和未转染的786-0细胞为对照组，Western blot鉴定hepaCAM蛋白在786-0中的表达；用莫能星(monensin)和二甲基阿米洛利(DMA)处理转染后肾癌细胞，检测肾癌细胞上清液及exosomes中hepaCAM蛋白的量的变化。MTT法检测hepaCAM蛋白是否可以抑制肾癌细胞增殖。
　　结果：成功构建并转染了hepaCAM重组腺病毒质粒，在肾癌细胞上清液中检测到hepaCAM蛋白的分泌，经药物处理后，莫能星明显增加了转染后肾癌细胞的hepaCAM蛋白的分泌量，而二甲基阿米洛利处理转染后肾癌细胞，能显著抑制细胞上清液中hepaCAM的分泌量。Western blot进一步证明hepaCAM蛋白存在于exosomes上。MTT法证明hepaCAM蛋白能明显抑制了肾癌细胞增殖。
　　结论：HepaCAM腺病毒质粒成功转染肾癌786-0细胞，通过exosomes途径分泌的hepaCAM蛋白能抑制肾癌细胞增殖。