吡柔比星协同hepaCAM基因对肾癌细胞增殖和周期影响的研究

摘要

第一部分：肾癌患者血尿检测及组织中cyclinB1、hepaCAM的表达和意义
　　目的：探讨肾癌患者尿标本中血尿的情况及组织中细胞周期蛋白B1(cyclinB1)与肝细胞粘附分子(hepatocyte cell adllesion molecule，hepaCAM)的表达情况和临床意义。
　　方法：采用尿干化学法及尿沉渣显微镜检法检测50例肾癌患者尿标本；用RT-qPCR检测cyclinB1及hepaCAM在32例肾癌组织及癌旁组织中的表达，并分析其与各临床参数之间的关系。
　　结果：50例肾癌患者中，出现肉眼血尿15例(30％)，干化学隐血阳性29例(58％)，沉渣镜检红细胞阳性27例(54％)。在32例手术获取的肾癌组织中，26例(81.3％)出现cyclinB1 mRNA下调，28例(87.5％)出现hepaCAM mRNA下调。肾癌组织cyclinB1及hepaCAM的mRNA水平均显著低于癌旁组织(P<0.05)。cyclinB1、hepaCAMmRNA的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤亚型及细胞核分级均无关。
　　结论：肾癌患者肉眼血尿发现率低，缺乏明显症状，可能是导致肾癌病情延误的原因之一，采用干化学法或沉渣显微镜法检测尿标本可提高血尿发现率，有助于早期发现肾癌；CyclinB1及hepaCAM在肾癌组织中发生明显下调，这是本研究深入探索肾癌术后后续治疗的基本前提。
　　第二部分：吡柔比星协同hepaCAM基因进一步下调肾癌细胞中cyclinB1的表达
　　目的：研究吡柔比星(pirarubicin，THP)联合hepaCAM基因对肾癌细胞株786-0的影响
　　方法：先用吡柔比星处理肾癌细胞株786-0，再用腺病毒作载体向786-0导入hepaCAM基因，以MTT测抑制率，FCM测细胞周期，RT-qPCR测hepaCAM及cyclinB1的mRNA水平，western blot及免疫荧光测hepaCAM及cyclinB1的蛋白表达。
　　结果：MTT显示：与药物对照组(THP/pAdH5)和基因对照组(pAdH5-hepaCAM)相比，实验组(THP/pAdH5-hepaCAM)抑制率显著升高(P<0.01)。FCM证实：实验组出现明显G2/M期阻滞。RT-qPCR检测到实验组cyclinB1 mRNA水平显著下调(P<0.05)。western blot及免疫荧光检测到cyclinB1蛋白水平明显降低。
　　结论：吡柔比星处理后，向肾癌786-0细胞导入hepaCAM基因，能显著降低cyclinB1表达，引起G2/M期阻滞，从而显著抑制癌细胞增殖。因此推测，利用吡柔比星与抑癌基因hepaCAM的协同作用，有望减少肾癌术后的复发。