白藜芦醇在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的抗凋亡作用与Sitr1-p53通路的关系

摘要

目的：
　　 白藜芦醇是第Ⅲ类组蛋白/非组蛋白去乙酰化酶Sirt1的激动剂，并能降低遭受缺血再灌注损伤时的心肌细胞凋亡。本研究的目的在于分析白藜芦醇的抑制心肌细胞凋亡作用与Sirt1-p53通路的关系，以期揭示白藜芦醇心肌保护作用的分子机制。
　　 方法：
　　 48只清洁级雄性SD大鼠，10～13周龄，体重200～250g，随机分为4组(n=12):缺血再灌注组（IR组）、白藜芦醇预处理+缺血再灌注组（RES+IR组）、白藜芦醇预处理+Sia1抑制剂EX527+缺血再灌注组（RES+EX+IR组）和Sirt1抑制剂EX527+缺血再灌注组(EX+IR组)。采用结扎冠状动脉左前降支(left anterior descendingcoronary artery，LAD)45分钟，再灌注120分钟的方法建立大鼠心肌缺血再灌注实验模型。(1) IR组:在冠状动脉左前降支下穿线并结扎45分钟，导致急性心肌缺血，剪开结扎线使心肌再灌注120分钟以建立心肌缺血再灌注损伤模型。结扎前15分钟经舌下静脉注入DMSO和PBS混合液(DMSO∶ PBS=1∶1)1ml，平衡溶剂的影响。(2) RES+IR组:建立心肌缺血再灌注损伤模型，分别在结扎前15分钟经舌下静脉注入白藜芦醇20mg/kg（溶液体积1ml）。(3) RES+EX+IR组:建立心肌缺血再灌注损伤模型，分别在结扎前15分钟经舌下静脉注入白藜芦醇20mg/kg和EX5271 ug/kg（溶液总体积1ml）。(4)EX+IR组:建立心肌缺血再灌注损伤模型，分别在结扎前15分钟经舌下静脉注入EX527 lug/kg（溶液体积1ml）。实验处理完成后，采集心肌组织标本，采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率;采用免疫组织化学法检测心肌组织中促凋亡蛋白BAX的表达;采用Western blot法检测心肌组织中Sirt1和乙酰化p53(Lys373&382)的表达。
　　 结果：
　　 1、各组心肌细胞凋亡率的比较:与IR组相比，RES+IR组心肌细胞凋亡率显著降低(P＜0.05）;而与RES+IR组相比，RES+EX+IR组心肌细胞凋亡率显著增加（P＜0.05）。IR组与EX+IR组的心肌细胞凋亡率差异无统计学意、各组缺血再灌注后心肌细胞中促凋亡蛋白BAX的表达量的比较:与IR组相比，RES+IR组心肌细胞内促凋亡蛋白BAX的表达量显著降低(P＜0.05);而与RES+IR组相比，RES+EX+IR组心肌细胞内促凋亡蛋白BAX的表达量显著增加(P＜0.05)。IR组与EX+IR组的心肌细胞内促凋亡蛋白BAX的表达量差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 2、各组心肌细胞中Sirt1表达量和乙酰化p53(lys373&382)的表达量的比较:与IR组相比，RES+IR组心肌细胞内Sirt1表达量显著增加而乙酰化p53(lys373&382)表达量显著降低(P＜0.05);而与RES+IR组相比，RES+EX+IR组心肌细胞内Sirt1表达量显著降低而乙酰化p53(lys373&382)表达量显著增加(P＜0.05)。IR组与EX+IR组的心肌细胞内Sirt1表达量和乙酰化p53(lys373&382)表达量差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 结论：
　　 白藜醇能够增加心肌组织内Sirt1表达量，进而可能使p53在第373和382赖氨酸位点乙酰化水平降低而抑制p53的促凋亡活性，最终抑制缺血再灌注后的心肌细胞凋亡。