HIF-1α与Wnt/β-catenin的相互关系并经该通路对缺氧胃癌细胞增殖与侵袭的影响

摘要

目的:构建β-catenin micRNA表达载体，研究HIF-1α与Wnt/β-catenin信号通路的关系，探讨HIF-1α经过该信号通路对胃癌细胞株SGC-7901增殖及侵袭的作用。
　　方法:构建β-catenin micRNA表达载体转染SGC-7901，建立靶向干扰β-catenin的稳定转染细胞株。RT-PCR检测稳定转染细胞株的干扰效果。采用倍增时间、平板克隆及侵袭实验观察对照组、脂质体组、阴性对照组、缺氧组、及缺氧干扰组中细胞增殖和侵袭能力的生物学效应的不同。采用Western blot及RT-PCR检测对照组、缺氧组、双重缺氧组及干扰组、缺氧干扰组、双重缺氧干扰组中HIF-1α、β-catenin、CyclinD1、MMP-7在各组中蛋白及mRNA的表达水平。
　　结果:靶向干扰β-catenin的稳定转染细胞株建立成功。对照组与脂质体组、阴性对照组比较没有统计学意义。与对照组比较，缺氧组细胞的倍增时间缩短、平板克隆形成数增多、细胞穿膜数增多侵袭能力增强;RNAi技术靶向干扰β-catenin后缺氧干扰组与缺氧组比较，细胞平板克隆形成数减少、倍增时间延长，细胞穿膜数减少。缺氧及双重缺氧状态下HIF-1α、β-catenin、CyclinD1、MMP-7蛋白及mRNA表达升高;采用RNAi技术靶向干扰β-catenin后，干扰组、缺氧干扰组及双重缺氧干扰组的HIF-1α、β-catenin、CyclinD1、MMP-7蛋白及 mRNA表达显著降低。双重缺氧干扰组-缺氧干扰组与缺氧干扰组-干扰组比较，CyclinD1和MMP-7的mRNA及蛋白表达水平增高。
　　结论:1）成功建立靶向干扰β-catenin的稳定转染细胞株SGC-7901。2）缺氧环境下β-catenin同时存在于HIF-1α的上下游并能够相互调控。3）HIF-1α调控β-catenin刺激Wnt/β-catenin信号通路激活，影响下游基因CyclinD1和MMP-7，促进缺氧胃癌的增殖及侵袭。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

第一部分 β-catenin micRNA表达载体的构建、筛选及靶向干扰β-catenin在人胃癌细胞中的稳定表达

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

第二部分 HIF-1α与Wnt／β-catenin信号通路在缺氧胃癌细胞中的相互作用

1 材料与方法

2．结果

3．讨论

4 小结

参考文献

第三部分 HIF-1α通过Wnt／β-catenin信号通路促进缺氧胃癌细胞的增殖及侵袭

1 材料和方法

2．结果

3 讨论

4 小结

参考文献

全文总结

附图

文献综述 与HIF-1α相关的信号转录因子共同促进肿瘤的增殖、侵袭及转移

致谢

攻读硕士期间发表的学术论文