水甘油通道蛋白9在非酒精性脂肪肝中作用的研究

摘要

目的:水甘油通道蛋9（aquaglyceroporin-9，AQP9）作为细胞膜上的甘油转运通道已被广泛认识，但对其在非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）发生发展过程中所发挥的作用所知甚少。我们利用慢病毒(lentivirus)相关RNA干扰技术，通过下调高脂饮食诱导的NAFLD大鼠模型肝AQP9的表达，抑制肝脏对甘油的吸收作用，探索AQP9在NAFLD发生发展过程中所产生的生理效应。
　　方法:将6-7周龄雄性SD大鼠随机分为4组:正常组、高脂组、对照组和转染组，每组5只。其中，正常组大鼠用普通饮食喂养8周，高脂组、对照组及转染组大鼠用高脂饮食喂养8周。后3组大鼠在高脂饮食喂养前一天，通过肝门静脉注射转染方式，分别予以等量的PBS溶液、lentivirus-scramble及lentivirus-shRNA-AQP9。8周后处死全部大鼠，运用蛋白免疫印迹(Western blot)、组织免疫组化及实时荧光定量PCR(Real time-PCR, RT-PCR)技术，检测各组大鼠AQP9蛋白和mRNA在肝脏中的表达情况;通过肝组织切片HE染色和油红O染色，以及测定肝组织内甘油和甘油三酯(Triglycercide，TG)含量，检测各组大鼠肝细胞中脂质沉积情况。
　　结果:Western blot及RT-PCR实验结果表明，与高脂组及对照组相比，转染组大鼠肝脏AQP9蛋白及mRNA表达量明显减少;组织免疫组化结果提示，转染组大鼠肝实质细胞膜上AQP9蛋白的表达较高脂组及对照组明显下降;肝组织切片HE染色及油红O染色结果显示，转染组大鼠肝细胞内TG沉积量与高脂组及对照组相比，均显著减少;试剂盒测定各组大鼠肝细胞内甘油及TG含量，结果表明转染组明显低于高脂组及对照组。
　　结论:重组慢病毒lentivirus-shRNA-AQP9转染大鼠后，成功下调肝细胞AQP9蛋白及mRNA的表达水平。抑制AQP9表达，能够减少肝细胞对甘油的转运，并减轻高脂饮食诱导NAFLD的肝细胞内脂质沉积量，即肝细胞脂肪变性程度，提示AQP9在肝细胞脂肪变性以及NAFLD发生发展过程中起着重要作用。

目录

声明

符号说明

摘要

前言

第一部分 构建重组慢病毒lentivirus-shRNA-AQP9

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

第二部分 构建NAFLD大鼠模型及相关的实验研究

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 肝型脂肪酸结合蛋白研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文