STIM1、ORAI1在外伤性癫痫大鼠中的表达

摘要

1.1研究目的:通过建立外伤性癫痫（PTE）大鼠模型，观察钙释放激活钙(CRAC)通道中的两个关键蛋白基质相互作用分子1(STIM1)和钙释放激活钙通道调节分子1(ORAI1/CRACM1)在PTE大鼠皮层脑组织中的表达情况，探讨这两个蛋白是否参与PTE的形成及其可能的机制。
　　 1.2研究方法:将84只成年SD大鼠随机分为对照组（42只）和实验组（42只）。实验组大鼠予左侧感觉运动皮层区域注射100mmol/L FeCl35μl，建立FeCl3 PTE模型，对照组大鼠予皮层相同位置注射5μl生理盐水作为对照。注射后通过观察大鼠的行为学表现以评估模型是否成功建立。在伤后6h、24h、72h、7d、14d、21d和28d共7个时间点，分别随机选取实验组和对照组各6只大鼠，收集伤侧皮层脑组织，通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测STIM1和ORAI1的mRNA表达水平，然后用Western blot和免疫组化检测STIM1和ORAI1蛋白的表达水平。
　　 1.3研究结果
　　 (1) PTE大鼠模型建立结果:对照组大鼠未见癫痫发作;实验组大鼠皮层注射FeCl3后出现典型的癫痫发作，制模成功率达84.0％，连续观察28天均可见典型的癫痫发作。
　　 (2)RT-PCR检测结果:实验组伤后各个时间点的STIM1和ORAI1的mRNA表达水平与对照组比较均显著增高（P＜0.05，P值均为0.000），72h组表达为最高峰(P＜0.05，P值均为0.000)。
　　 (3) Western blot检测结果:实验组大鼠皮层STIM1在伤后6h的蛋白表达与对照组比较无统计学差异(P＞0.05，P值为0.322)，此后6个时间点的蛋白表达与对照组比较均显著增高(p＜0.05，伤后24h、72h、7d、14d、21d、28d的P值分别为0.006、0.000、0.003、0.002、0.006、0.005)，72h组表达为最高峰(P＜0.05，P值为0.000);实验组ORAI1的蛋白表达趋势与STIM1类似，在伤后6h的蛋白表达与对照组比较无明显变化(P＞0.05，P值为0.054)，此后6个时间点的蛋白表达与对照组比较均显著增高（P＜0.05，伤后24h、72h、7d、14d、21d、28d的P值分别为0.001、0.000、0.000、0.001、0.002、0.003），72h组表达为最高峰（P＜0.05，P值为0.000）。
　　 (4)免疫组化检测结果:伤后72h，STIM1在对照组伤灶周边皮层神经元中仅有弱阳性表达，实验组STIM1在细胞膜表面的阳性表达量与对照组比较显著增加（t=16.233，P＜0.05）;伤后72h，ORAI1在对照组伤灶周边皮层神经元有弱阳性表达，实验组ORAI1在细胞膜表面的阳性表达量与对照组比较显著增加（t=17.339，P＜0.05）。
　　 1.4研究结论:STIM1、ORAI1在PTE大鼠皮层脑组织中表达显著上调，提示CRAC通道与PTE的形成关系密切，可能参与了PTE的形成，并可能成为潜在的抗癫痫治疗靶点。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

第一部分 制备外伤性癫痫大鼠模型

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二部分 外伤性癫痫大鼠STIM1、ORAI1的表达

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 外伤性癫痫防治研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表论文情况