乙肝病毒逆转录酶变异性位点和多态性位点对HBV复制的影响

摘要

目的:前期阿德福韦酯Ⅲ期临床研究中发现HBV逆转录酶区多态性位点rtN118H及变异位点rtH126Y，验证这些位点是否与ADV原发性耐药有关。
　　方法:通过FSR(Fragment substitution reaction)的方法，将源于耐药患者的含有rtN118H的HBV序列，构建到质粒PCH9-EGFP上(PCH9-1);定点诱变含有HBV基因型D型的野生型质粒PCH9-EGFP，使其含有rtN118H突变(PCH9-118)。然后将两种方法得到的重组或诱变质粒转染肝癌细胞系HepG2进行体外ADV表型耐药分析。
　　结果:通过两种方法构建的重组质粒都能够成功转染HepG2细胞，并且都能够在体外很好的表达HBsAg和HBeAg。含有野生型HBV序列的质粒(PCH9-EGFP)对ADV的IC500.109±0.004μM;通过FSR构建的含有rtN118H的诱变质粒(PCH9-1)对ADV的IC500.112±0.001μM(P＞0.05);通过定点诱变方式含有rtN118H的突变质粒(PCH9-118)对ADV的IC500.108±0.002μM(P＞0.05);与野生型相比无差异性，没有统计学意义。
　　结论:rtN118H变异位点对ADV仍然很敏感，该位点可能与与ADV原发性耐药无关，提示rtN118H变异后，ADV治疗仍然有效。

目录

声明

英汉名词缩略对照表

摘要

1 前言

2 材料与方法

2．1 材料

2．2 方法

3 结果

3．1．1 PCH9-EGFP质粒酶切结果

3．1．2 质粒PCH9-EGFP转染HepG2后检测HBeAg表达和HBsAg表达(ELISA)

3．1．3 荧光定量PCR检测质粒PCH9-EGFP HBVDNA结果

3．2 源于患者HBVRT区FSR构建的重组质粒进行Adefovir药敏分析

3．3 定点诱变质粒PCH9-EGFP及转染细胞和adefovir药敏分析

结论

4 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 乙型肝炎病毒耐药突变研究进展

致谢

攻读学位期间发表的论文及参加的会议