穿心莲内酯抗单一与混合生物膜作用及其与庆大霉素的协同作用

摘要

本研究分为二部分：
　　第一部分：体外实验
　　[目的]研究穿心莲内酯(Andrographolide，Andro)抗铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aures)单一与混合生物膜作用及其与庆大霉素(Gentamicin，GEN)的协同作用。
　　[方法]本研究选择铜绿假单胞菌PA01与金黄色葡萄球菌的临床分离株CY001、CY002以及标准株ATCC25923作为实验菌株。比浊法测定Andro(100μ g/ml)对PA01与S.aureus各菌株生长的影响;建立PA01与S.aureus单一与混合生物膜的体外模型，分为对照组、Andro干预组、GEN干预组以及Andro与GEN联合干预组，结晶紫染色后，酶标仪测量0D600nm值间接观察各组生物膜的形成能力;扫描电镜下直接观察各组生物膜的结构。
　　[结果]100μ g/mlAndro作用下，PA01与S.aureus各菌株生长曲线与对照组相比无明显差异（P＞0.05）;不论按照何种比例混合培养，在PA与S.aureus的混合生物膜中，PA的数量始终多于S.aureus;除CY002不形成生物膜，各组间两两比较均无明显差异外(P＞0.05)，不管是PA与S.aureus的单一生物膜还是它们的混合生物膜，与对照组相比，在干预条件下形成的生物膜均减少（P＜0.005），其中穿心莲内酯对生物膜的抑制作用强于庆大霉素，差异具有统计学意义(P＜0.05)，两者联用时的抗生物膜作用显著强于它们分别单用(P＜0.05);扫描电镜下形态观察提示各干预条件对PA与S.aureus的单一与混合生物膜均有抑制作用，以Andro与GEN联用的抑制作用最为明显。
　　[结论]在PA与S.aureusAndro的混合生物膜中，PA占主导地位;Andro对PA与S.aureus无直接杀菌作用，但对它们的单一与混合生物膜均具有良好抑制作用;其与GEN联合应用，具有协同抗生物膜作用。
　　第二部分：体内实验
　　[目的]建立小鼠慢性创伤单一与混合细菌生物膜感染模型，以研究穿心莲内酯(Andrographolide，Andro)对伤口生物膜的作用及其对伤口愈合的影响。
　　[方法]建立小鼠Ⅲ°烫伤单一与混合细菌生物膜感染的体内模型，分为空白对照组（烫伤后未感染）、对照组、Andro干预组、GEN干预组以及Andro与GEN联合干预组，取伤口组织制作病理切片观察并分析;将皮肤组织匀浆后ELISA法检测炎症因子IL-1β，IL-6，TNF-α的表达水平;扫描电镜下直接观察各组伤口中生物膜的结构。
　　[结果]皮肤组织的病理学分析显示，与对照组与庆大霉素干预组相比，穿心莲内酯干预组与联合干预组的真皮空泡和炎症细胞浸润数量明显减少，新生肉芽组织及毛细血管形成大量增加;在烫伤感染后，小鼠皮肤伤口组织各炎性因子表达量显著升高（空白对照组与对照组相比，P值均小于0.001），庆大霉素能较弱的降低炎性因子IL-6（除CY002与CY001生物膜模型组）与TNF-α（仅CY001+PA01与ATCC25923+PA01生物膜模型组）的表达，而穿心莲内酯能够显著降低伤口组织炎症因子IL-1β，IL-6，TNF-α的表达水平(P值均小于0.005)，其与庆大霉素联用，能够更为显著的降低炎症因子IL-6（除CY001+PA01与ATCC25923+PA01生物膜模型组）与TNF-α（仅CY002+PA01与ATCC25923+PA01生物膜模型组）的水平;扫描电镜下形态观察提示各干预条件对伤口中PA与S.aureus的混合生物膜均有抑制作用，以Andro与GEN联用的抑制作用最为明显。
　　[结论]穿心莲内酯可以抑制伤口中生物膜的形成，降低伤口组织炎症因子IL-1β，IL-6，TNF-α的表达水平，减轻局部炎症反应，促进肉芽组织的形成，加快伤口愈合。它与GEN联合应用，具有协同抗生物膜作用，体现出减毒增效优势。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

第一部分 体外实验

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二部分 体内实验

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

全文小结

参考文献

文献综述 生物膜对伤口愈合的影响研究进展

致谢

攻读硕士期间发表的论文