小分子蛋白Sulfiredoxin-1对大鼠星形胶质细胞氧化应激损伤后细胞凋亡的保护作用及机制研究

摘要

背景:
　　星形胶质细胞的凋亡起在中枢神经系统损伤，如脑缺血、阿尔茨海默氏症和帕金森氏症，起着至关重要的作用。小分子蛋白Sulfiredoxin-1(Srxn1)，属于保守的内源性Sulfiredoxin抗氧化家族的成员，具有神经保护作用，可能与抗氧化和抗凋亡有关。然而，Srxn1在脑缺血损伤中的抗凋亡机制还没有得到充分深入的研究。
　　目的:
　　探讨Sulfiredoxin-1对OGD/H2O2诱导的星形胶质细胞氧化损伤后细胞凋亡的保护作用及其可能机制。
　　方法:
　　(1)应用慢病毒转染技术将短发卡Srxn1（sh-Srxn1）基因干扰载体及阴性载体瞬时转染至星胶细胞中，OGD作用于转染细胞6h或100μM H2O2作用于转染细胞6h以模拟氧化应激损伤模型。
　　(2)运用MTS和LDH测定细胞活性和细胞损伤程度。
　　(3)用免疫细胞化学Hoechst33342和流式细胞术AV/PI双染检测细胞凋亡率。
　　(4)激光共聚焦JC-1探针和Fluo-3，AM探针分别检测线粒体膜电位(△ψm)及细胞内游离Ga2+变化。
　　(5) Western blot检测Srxn1、cyt.c、caspase-9、caspase-3、PARP、bax、bcl-2、caspase-12的蛋白水平，QPCR检测Srxn1的mRNA水平。
　　结果:
　　(1) MTS和LDH显示，干扰Srxn1后，细胞活性明显下降，细胞损伤明显加重(p＜0.05，p＜0.01)。
　　(2) Hoechst33342及流式AV/PI检测显示，干扰Srxn1后，细胞凋亡显著增加(p＜0.01)。
　　(3) JC-1探针显示，干扰Srxn1后，线粒体膜电位(△ψm)明显下降(p＜0.01)。
　　(4) Western blot检测结果提示，干扰Srxn1后，细胞的Cyt.C、caspase-9、 caspase-3、 PARP、 bax蛋白水平表达明显升高，bcl-2的表达显著降低(p＜0.05，p＜0.01)，而细胞内caspase-12的表达无明显改变(p＞0.05)。
　　(5) Fluo-3,AM探针显示，干扰Srxn1后，细胞内游离Ga2+无明显改变(p＞0.05)。
　　结论:
　　Srxn1能通过抗凋亡的途径来保护大鼠星形胶质细胞抵御OGD以及H2O2诱导的氧化应激损伤，且此保护作用与线粒体凋亡通路相关。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果

2．1 氧化应激损伤(OGD、H2O2)对Srxn1干扰后Srxn1表达的影响

2．2 Srxn1干扰对氧化应激损伤的星胶细胞生存率及损伤率的影响

2．3 Srxn1干扰对氧化应激损伤的星胶细胞凋亡的影响

2．4 Srxn1干扰对氧化应激损伤损伤的星胶细胞线粒体膜电位(Δψm) 磁

2．5 Srxn1干扰对氧化应激损伤的星胶细胞线粒体途径凋亡相关蛋白表达的影响

2．6 Srxn1干扰对氧化应激损伤的星胶细胞内质网途径凋亡相关因子的影响

3 讨论

结论

参考文献

文献综述

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文