铜绿假单胞菌临床菌株耐药性变迁及其生物膜形成能力与毒力的研究

摘要

第一部分2011年至2013年重庆地区儿童分离铜绿假单胞菌耐药性变迁分析
　　目的：
　　探讨重庆地区儿童分离铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)在感染中的布情况和耐药情况，为指导临床合理应用抗菌药物提供依据。
　　方法：
　　回顾分析2009年至2013年为期5年重庆医科大学附属儿童医院各临床科室患儿检出的所有PA菌株，共计2508株，统计其检出率、科室分布、标本来源，分析各年度PA对常用抗菌药物耐药性情况。
　　结果：
　　5年共分离PA菌株2508株，检出率3.33％～4.56％不等;检出PA最多的科室为呼吸科，检出PA538株，占总标本20.08％;检出PA最多的标本类型为痰标本，检出PA为1789株，占总标本66.38％;统计5年PA不敏感率，PA对常用药哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、美罗培南和头孢他啶的不敏感率较高;儿科重症监护室(pediatric intensivecare unit，PICU)分离PA对多种常用抗菌药物不敏感率明显高于我院其他科室。
　　结论：
　　自2009年至2013年，我院PA检出率逐年增高，且主要分布于呼吸科、PICU和新生儿科，尤其PICU分离PA耐药情况严重，以上科室需注意合理应用抗菌药物，预防多重耐药PA菌株的出现。
　　第二部分铜绿假单胞菌临床菌株生物膜形成与毒力的研究
　　目的：
　　探讨形成生物膜能力不同的铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa，PA）临床菌株的毒力差别。
　　方法：
　　结晶紫染色法检测12株PA体外形成生物膜(biofilm，BF)能力，BCA法检测PA上清蛋白浓度，弹性蛋白-刚果红(elastin-Congo red，ECR)检测弹性蛋白酶(elastase B，LasB)活性，氯仿萃取法检测绿脓菌素(pyocyanin，PCN)含量，LB平板检测泳动能力和蹭动能力;PCR扩增PA lasR、lasI、lasB、rhlR、rhlI和rhlAB基因;对PA lasR、lasI、rhlR和rhlI基因进行测序分析并与PAO1比对。对照菌株为PAO1。
　　结果
　　12株PA临床菌株按其BF生成能力分为BF++和BF+两组，结晶紫染色结果后检测波长570nm处吸光度值分别为12.075±2.453和1.614±0.133。BCA检测PA上清蛋白含量，各PA临床菌株之间无明显差异。两组PA溶解ECR后上清液波长495nm处吸光度分别为0.290±0.140和0.065±0.049，氯仿萃取PCN两组PA盐酸层波长520nm处吸光度0.192±0.696和0.153±0.036。两组PA泳动圈直径分别为12.55±4.60mm和6.44±1.27mm。两组PA蹭动范围直径分别为12.55±4.60mm和6.44±1.27mm。PCR扩增lasR、lasI、lasB、rhlR、rhlI和rhlAB基因，12株PA菌株均为阳性。PCR扩增QS基因全长并将产物送测序，将RhlI氨基酸序列与PAO1作比对，12株PA RhlI与PAO1同源性均大于96.43％。bj8 RhlR有20个氨基酸的缺失。
　　结论：
　　BF形成能力强的PA LasB活性也较强;j8菌株存在rhlI基因突变。

目录

声明

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摘要

第一部分 2009年至2013年重庆地区儿童分离铜绿假单胞菌耐药性变迁分析

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二部分 铜绿假单胞菌临床菌株生物膜形成与毒力的研究

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

全文小结

参考文献

文献综述 铜绿假单胞菌密度感应系统及其与生物膜形成的关系

致谢

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