Sonic Hedgehog通过microRNA92a转录后调控KLF4在内皮功能中的作用机制研究

摘要

Shh（Sonic hedgehog）信号通路作用于动脉粥样硬化病变。有研究表明microRNA-92a对于维持内皮功能有重要作用。在人髓母细胞瘤中，Shh被证实可以调控microRNA-92a的表达。在内皮细胞中， Shh信号通路是否能够调节内皮功能仍未见报道。本研究的目的是探讨Shh信号通路在调节内皮细胞功能中的作用机制。
　　方法与结果:在人脐静脉内皮细胞（ human umbilical vein endothelial cells， HUVECs)中，过表达 Shh信号通路可以上调microRNA-92a的表达水平,下调KLF4（krüppel-like factor-4）的表达水平。反之，敲低Shh信号通路可以使microRNA-92a的表达水平下降和KLF4的表达水平升高，说明了Shh信号通路可以调控KLF4的表达。计算机软件预测到在KLF4的3’端非编码区（3’-untranslated region,3’UTR）存在两个高度保守的microRNA-92a的结合位点。我们应用荧光素酶报告基因证实了在microRNA-92a上存在与KLF4的3’端非编码区序列结合的特殊结合位点。下调microRNA-92a可以使KLF4，内皮型一氧化氮合酶（eNOS）以及血栓弹力蛋白在蛋白及mRNA水平的表达均升高。另外，我们把 Shh-cDNA和 anti-miR-92a共转染到HUVEC中，与只转染Shh-cDNA的细胞相比，KLF4的蛋白表达水平恢复到正常HUVECs中KLF4的表达水平。本研究结果证实了上调Shh信号通路可以上调 microRNA-92a，microRNA-92a转录后调控 KLF4的表达,从而影响内皮细胞的功能。
　　结论:本研究证实了Shh信号通路可以通过microRNA-92a转录后调控KLF4在内皮功能中的作用。

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前言

参考文献

第一部分 SHH信号通路蛋白在人脐静脉内皮细胞中表达

1.材料与试剂

2.方法

3.结果

4.讨论

参考文献

第二部分 SHH信号通路调节microRNA-92a和KLF4在人脐静脉内皮细胞中表达

1.材料与试剂

2.方法

3.结果

4.讨论

参考文献

第三部分 microRNA-92a与KLF4的结合位点的理论模拟预测与报告基因验证

1.材料与试剂

2.方法

3.结果

4.讨论

参考文献

第四部分 SHH通过microRNA-92a对KLF4进行转录后调控

1.材料与试剂

2.方法

3.结果

4.讨论

参考文献

全文总结

文献综述: KLF4在血管疾病中对平滑肌细胞及内皮细胞的作用

致谢

攻读博士学位期间发表的论文