MCPH1增强宫颈癌Caski细胞对顺铂敏感性的效应研究

摘要

MCPH1（Microcephalin1），也称为BRIT1，具有抑制人类端粒酶逆转录酶的功能，是细胞周期检测点的调节蛋白，参与DNA损伤应答和修复、维持基因组的稳定性。MCPH1的表达缺失可导致原发性小头畸形，参与人类多种恶性肿瘤的发生与发展，由此证明MCPH1是一个肿瘤抑制基因。宫颈癌是妇女常见的侵袭性肿瘤，研究证实，宫颈癌中MCPH1呈表达缺失，并且MCPH1表达缺失与宫颈癌细胞增殖、凋亡等多种生物学行为有关。顺铂是宫颈癌治疗中常用化疗药物，主要通过激活死亡受体信号转导通路，引起肿瘤细胞凋亡，但顺铂的长期使用使肿瘤细胞对顺铂的耐药性增强。
　　鉴于MCPH1是一个肿瘤抑制基因，本课题通过将MCPH1作为增强化疗药物敏感性的因子，将MCPH1过表达体系和顺铂结合处理宫颈癌Caski细胞，检测Caski细胞增殖、凋亡效应的改变，并初步探讨其机制。采用的主要实验方法如下：
　　1.经重组慢病毒Lent-MCPH1和慢病毒空载体Lent-vector转染并筛选的宫颈癌Caski细胞，即过表达组（Lent-MCPH1）和阴性对照组（Lent-vector），分别用顺铂处理，MTT法检测生长抑制效率，制定增殖抑制曲线。
　　2.将Lent-MCPH1组和Lent-vector组分别用顺铂处理后，DAPI染色法观察细胞凋亡形态，用流式细胞仪检测细胞凋亡率。
　　3.Real-time PCR检测相关基因Bax、Caspase-3和p53 mRNA表达水平。
　　通过以上试验，得出以下结果和结论：
　　1.Lent-vector组细胞经顺铂处理后，其增殖明显受到抑制；而在顺铂处理的两组细胞中，与Lent-vector对照组相比，Lent-MCPH1组细胞受到的生长抑制作用更加明显。
　　2.DAPI染色形态学显示，Lent-vector组细胞经顺铂处理后，细胞凋亡明显增多；而在顺铂处理的两组细胞中，Lent-MCPH1组的凋亡小体的量比Lent-vector组明显增多，可见致密强荧光。同样，流式细胞仪检测细胞凋亡率结果为，顺铂处理Lent-vector细胞后，其早期和晚期凋亡率均明显升高，与顺铂处理前相比其总凋亡率升高了44.84％；而在顺铂处理的两组细胞中，Lent-MCPH1组的总凋亡率比Lent-vector组高13.21%，其中晚期凋亡更明显，Lent-MCPH1组比Lent-vector组高17.16%。
　　3.Real-time PCR检测凋亡相关基因mRNA表达水平显示为：Lent-vector组细胞经顺铂处理前后相比，处理后的细胞Bax、Caspase-3、p53的mRNA表达分别上升0.61、0.93和1.85倍；而在顺铂处理的两组细胞中，Lent-MCPH1组细胞Bax、Caspase-3、p53的mRNA表达比Lent-vector组分别高出1.96、0.78、0.12倍。
　　MCPH1可通过抑制增殖和促进凋亡等机制，来增强宫颈癌Caski细胞对顺铂的敏感性。

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封面

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英汉缩略语名词对照

中文摘要

英文摘要

前言

1材料与方法

1.1材料

1.1.1宫颈癌细胞系

1.1.2主要试剂与仪器

1.1.3 Real-time PCR引物序列

1.2方法

1.2.1宫颈癌细胞培养与保存

1.2.2 MTT检测生长抑制效率

1.2.3 DAPI染色观察凋亡形态

1.2.4流式细胞仪检测凋亡

1.2.5实时荧光定量PCR

1.2.6统计学分析

2实验结果

2.1 MCPH1增强了顺铂的抑制增殖作用

2.2 DAPI染色显示MCPH1增强了顺铂的促凋亡作用

2.3流式细胞仪检测凋亡显示MCPH1增强了顺铂的促凋亡作用

2.4 Real-time PCR检测显示MCPH1增强了凋亡相关基因的表达

3讨论

全文总结

参考文献

文献综述:MCPH1功能的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文