分化抑制因子1基因对BMP-2促进兔椎间盘软骨终板细胞软骨特性基因表达的影响

摘要

目的：探讨通过慢病毒干扰细胞分化抑制因子1基因表达，对BMP-2增加兔椎间盘软骨终板细胞软骨特异性基因Ⅱ型胶原、aggrecan表达的影响。
　　方法：兔椎间盘软骨终板组织从新西兰大白兔获取，分离并培养软骨终板细胞，使用第2代软骨终板细胞进行实验。使用绿色荧光蛋白慢病毒（GFP LV）、高表达Id1基因慢病毒(Id1+LV)及RNA干扰Id1基因慢病毒分别转染二代软骨终板细胞，通过荧光显微镜了解慢病毒转染情况,RT-PCR及Western blot法检测慢病毒转染兔软骨终板情况，不同慢病毒转染对兔软骨终板细胞Id1 mRNA表达和Id1蛋白合成的影响。RNAi Id1、高表达Id1慢病毒分别和BMP-2慢病毒共同转染软骨终板细胞，并设置BMP-2慢病毒转染组、空载慢病毒转染组对照，采用实时荧光定量 PCR（RT-PCR）、ELISA法观察软骨终板内 Id1表达上调或下降，Id1蛋白合成差异对 BMP-2上调椎间盘终板软骨终板细胞合成Ⅱ型胶原和aggrecan的作用。
　　结果：
　　（1）慢病毒转染兔软骨终板后与原代对比，细胞形态无明显改变，高表达Id1 LV和RNAi Id1 LV能有效转染兔软骨终板细胞，并干扰内源性Id1基因的表达。
　　（2）BMP-2 LV和高表达Id1 LV共同转染兔软骨终板细胞后，COLⅡ、aggrecan mRNA表达和蛋白合成均显著高于BMP-2 LV、高表达Id1 LV单独转染，比较差别有统计学意义（P<0.05）。
　　（3）终板细胞内Id1基因表达下调后，软骨终板细胞合成Ⅱ型胶原蛋白与aggrecan明显下调（P<0.05）。
　　结论：Id1基因表达上调能够增加 BMP-2促软骨终板细胞合成Ⅱ型胶原和ACAN的作用。

目录

封面

声明

目录

英汉缩略语名词对照

中文摘要

英文摘要

前言

1材料与方法

1.1实验动物及主要材料、仪器

1.2兔软骨终板细胞分离及培养方法

1.3慢病毒转染EPCs的效率及转染后EPCs内Id1基因表达的变化

1.4不同Id1基因表达水平对BMP-2增强EPCs合成COL II和ACAN的影响

1.5统计学方法

2结果

2.1椎间盘软骨终板细胞形态学观察

2.2慢病毒转染兔软骨终板细胞效率和转染后EPCs 内Id1基因mRNA表达的变化

2.3 Id1表达变化对BMP-2促进软骨终板细胞软骨特异性基因表达的影响

3讨论

4结论

参考文献

6附图

文献综述: 软骨终板生理功能及退变因素

致谢

攻读学位期间发表的学术论文目录