血管紧张素转换酶2(ACE2)抑制β淀粉样蛋白(Aβ)诱导RPE细胞炎症反应的作用及其机制

摘要

目的：
　　探讨过表达肾素-血管紧张素系统(RAS)的重要组成成分血管紧张素转换酶2(ACE2)是否能抑制β淀粉样蛋白(Aβ)诱导RPE细胞炎症反应。
　　方法：
　　细胞凋亡检测法（Annexin-V FITC/PI双染色法）和Cell counting kit-8(CCK-8)实验分析Aβ1-42刺激RPE细胞的最佳浓度及时间。用脂质体转染法将含有ACE2基因的质粒转染人类原代RPE（hRPE）细胞和ARPE-19细胞6小时后，1μM的Aβ1-42刺激RPE细胞48小时。Real-time PCR、Western blotting和ELISA技术分别检测ACE2及炎性细胞因子的mRNA和蛋白表达。Ang-(1-7)选择性拮抗剂A779用于验证ACE2下游Ang-(1-7)的激活。
　　结果：
　　诱导RPE细胞产生炎症反应的最佳浓度和时间为1μM，48小时。与对照组Aβ42-1相比，Aβ1-42刺激RPE细胞可引起炎性细胞因子IL-1β和MCP-1的升高。ACE2及其下游Ang-(1-7)的表达水平在ACE2质粒转染hRPE细胞和ARPE-19细胞中均有明显的升高。过表达ACE2使Aβ1-42诱导RPE产生的炎性细胞因子IL-1β和MCP-1降低。此外，Ang-(1-7)选择性拮抗剂A779能抵消ACE2的保护性作用。
　　结论：
　　过表达ACE2抑制Aβ1-42诱导RPE细胞引起的炎症反应，其保护性作用通过ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴的激活发挥效应。由于Aβ引起的视网膜炎症参与了早期AMD的发病机理，提示调节ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴可能成为治疗早期AMD炎症反应的新靶点。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

1.2 细胞培养

1.3 Aβ1-42多肽制备

1.4 质粒转染

1.5 细胞分组及处理方案

1.6 细胞存活率检测(CCK-8)

1.7 Annexin-V FITC/Propidium Iodide (PI) 细胞凋亡检测

1.8 实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测

1.9 Western Blotting检测

1.10 ELISA检测

1.11 统计学分析

2 结果

2.1 RPE细胞鉴定

2.2 Aβ1-42对ARPE-19细胞的存活率及凋亡的影响

2.3 Aβ1-42刺激ARPE-19细胞炎性因子的变化

2.4 过表达ACE2的 mRNA和蛋白水平的变化

2.5 过表达ACE2降低Aβ1-42引起的炎性细胞因子的表达

2.6 Ang-(1-7)拮抗剂A779抑制ACE2的保护性作用

2.7 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴的激活

3 讨论

结论

参考文献

文献综述:肾素-血管紧张素系统(RAS)在眼科疾病中的研究进展

致谢

硕士期间发表的学术论文