沉默DRP1通过调控RHOA/ROCK1通路活性抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭

摘要

目的：动力相关蛋白1(DRP1)是新近发现的一种可影响多种肿瘤的发生、增殖、转移等过程的分子，但其在胶质瘤增殖和侵袭中的作用尚不清楚。本研究的主要目的是明确 DRP1蛋白在胶质瘤中的表达情况，并探索其对胶质瘤增殖和侵袭能力的影响及可能的作用机制。
　　方法：本研究首先用组织芯片免疫组织化学染色测定人脑胶质瘤组织和正常人脑组织中DRP1蛋白的表达情况，然后利用小干扰RNA沉默U251胶质瘤细胞DRP1基因，并应用EdU试剂盒(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine，EdU)和CCK-8(Cell Counting Kit-8，CCK-8)试剂盒法检测胶质瘤细胞的增殖能力变化，应用Transwell法检测胶质瘤细胞侵袭能力的改变，用鬼笔环肽免疫荧光染色法检测F-actin的分布变化和伪足、褶皱等细胞形态改变。此外，本研究还通过Western blot检测沉默DRP1基因对 RHOA和 ROCK1表达情况的影响，用免疫共沉淀检测DRP1和RHOA之间的相互作用。
　　结果：DRP1蛋白在人胶质瘤组织中的表达水平明显高于正常脑组织，并且其表达水平与胶质瘤病理分级呈正相关。在体外培养U251胶质瘤细胞中沉默DRP1基因可改变胶质瘤细胞中F-actin的分布，减少了胶质瘤细胞伪足和褶皱数量，并降低胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力。此外，沉默DRP1可降低胶质瘤细胞中RHOA和ROCK1的表达水平，而DRP1蛋白与RHOA蛋白之间则存在相互作用。
　　结论：DRP1表达于人胶质瘤组织中，且与恶性程度呈正相关，其可能是胶质瘤细胞增殖和侵袭的促进因素，且与RHOA有相互作用，并可能通过促进RHOA和ROCK1的表达而促进胶质瘤细胞增殖和侵袭。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1材料与方法

1.1 材料

1.1.1人脑胶质瘤组织芯片、细胞系

1.1.2 主要试剂、耗材

1.1.3 主要实验仪器与设备

1.2 实验方法

1.2.1 免疫组化

1.2.2 细胞的培养、冻存与复苏

1.2.3 构建目的转染细胞系

1.2.4 Western blot

1.2.5 免疫共沉淀实验

1.2.6 EdU增殖实验

1.2.7 CKK-8实验

1.2.8 Transwell小室侵袭实验

1.2.9 鬼笔环肽骨架染色实验

1.2.10 统计分析

2结果

2.1 组织芯片免疫组化检测DRP1在胶质瘤组织中的表达情况

2.2 Western blot检测siRNA沉默DRP1情况

2.3 EdU细胞增殖实验检测胶质瘤细胞的增殖能力

2.4 CCK-8实验检测胶质瘤细胞的增殖能力

2.5 Transwell实验检测胶质瘤细胞的侵袭能力

2.6 F-actin免疫荧光染色检测胶质瘤细胞骨架改变情况

2.7 Western blot检测沉默DRP1后RHOA、ROCK1的表达情况

2.8 免疫共沉淀检测DRP1与RHOA相互作用情况

3讨论

参考文献

全文总结

文献综述：线粒体及动力相关蛋白1在恶性肿瘤中的研究进展

致谢

硕士期间发表的论文