Syntaxin1B介导的多巴胺受体改变在苯并[a]芘诱发自主活动兴奋中的作用

摘要

苯并[a]芘（Benzo[a]pyrene,B[a]P）是环境中多环芳烃最为常见的一类化学污染物，主要通过呼吸道、消化道及皮肤黏膜进入人体，长时间的暴露会蓄积在人体组织中。国内外研究表明 B[a]P具有神经毒性，表现在对新生儿神经系统发育，对儿童注意力缺陷及多动症等精神疾病；对青少年的学习记忆及运动；对职业工人学习记忆及神经功能等。
　　B[a]P暴露对健康的危害体现在很多方面，慢性B[a]P暴露会对人体多个系统产生异常变化，包括神经、呼吸，消化，免疫系统等。与其他组织相比，神经细胞是不可再生细胞，它对毒物的作用非常敏感。前期人群研究报道，亚慢性B[a]P暴露对儿童的神经系统有损伤作用，体现为脑功能受到抑制，从而导致神经组织发育障碍和智力低下，体现在运动行为，认知以及学习记忆等方面。通过动物实验，发现染毒组的大鼠步下平台次数增多，潜伏期缩短，游泳时间降低。有文献报道B[a]P或其代谢物对N-甲基-D天冬氨酸受体产生的影响研究中,表现在脑组织中的海马、小脑及杏仁核，提示B[a]P及其代谢物对小脑有影响。有研究显示，小脑负责调节肌张力，保持身体平衡和协调精细运动等，B[a]P暴露会导致脑组织质量低于空白组(P＜0.01)；电镜下小脑形态受到损伤，导致小鼠小脑神经元损伤。结合以上结果推测，小脑可能是B[a]P毒性作用的靶器官。经过文献调研，发现鲜有对于B[a]P暴露对小脑影响相关研究，且B[a]P影响动物运动协调及自主活动的机理目前尚不明确。
　　目的：
　　通过对SD幼鼠连续7周B[a]P灌胃染毒，采用行为学旷场实验及足迹实验，探讨B[a]P亚慢性染毒对SD大鼠自主活动及运动协调能力的影响，随后从神经递质传递过程的角度，探讨早期B[a]P暴露引起神经行为学改变的SD大鼠小脑组织上神经递质传递过程中相关物质变化情况。
　　方法：
　　1、选用5日龄的健康雄性SD大鼠30只，随机分为五组，即空白对照组，溶剂组，B[a]P低剂量组(0.02 mg/kg)、中剂量组(0.20 mg/kg)及高剂量组(2.00 mg/kg)；每组各6只；空白对照组不做任何处理，溶剂组灌以等量植物油,B[a]P染毒按照各组染毒剂量灌胃，每天观察并称重灌胃一次，连续灌胃染毒7周。
　　2、采用旷场实验和足迹实验，记录大鼠在旷场实验中的爬行总格子数，直立次数及粪便颗粒数，及其在足迹实验中的后跟脚迹轨迹等相应指标以评价其自主活动及运动协调能力。
　　3、HE染色观察小脑组织形态变化；
　　4、电镜观察小脑组织突触结构及测量突触间隙变化；
　　5、免疫组化及Western Blot检测小脑中突触前膜蛋白Syntaxin1B和神经递质多巴胺DRD1的表达。
　　结果：
　　1、暴露染毒期间，SD幼鼠一般情况良好。染毒结束后，各染毒组SD大鼠体重均明显低于空白组（P＜0.05）。
　　2、旷场实验结果显示：经7周B[a]P暴露，染毒组各组爬行总格子数及直立次数较空白组及溶剂组明显增加（P＜0.05），提示B[a]P暴露促进自主活动。足迹实验结果显示，B[a]P暴露49天后，各组SD大鼠在步宽、步长、步态变化及角度变化4个参数指标间并无统计学差异（P＞0.05）。
　　3、HE染色观察发现，各组小脑整体结构良好，能看到正常的叶片和层状结构。与对照组比较，染毒组小脑组织分子细胞层未见明显改变；而小脑浦肯野细胞层出现PC胞浆染色淡，且不均匀；颗粒细胞层破坏，宽度明显缩短，细胞数量减少，高剂量组尤为明显。
　　4、电镜结果：B[a]P暴露49天后，与对照组比较，中、高剂量组突触间隙均增加（P＜0.000）。
　　5、免疫组化结果显示检测到突触前膜蛋白Syntaxin1B和神经递质多巴胺DRD1在小脑组织有表达。Western-blot结果显示，Syntaxin1B蛋白及DRD1蛋白表达有增加趋势。
　　结论：
　　亚慢性B[a]P暴露后，B[a]P致SD幼鼠在生长发育中体重下降；促进SD大鼠自主活动，但对其运动协调能力作用不明显；损害小脑组织中正常形态；小脑神经递质多巴胺DRD1和突触前膜蛋白Syntaxin1B蛋白表达改变。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

第一部分 B[a]P对SD大鼠自主活动与运动平衡能力的影响研究

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

第二部分 Syntaxin1B介导的多巴胺受体改变在B[a]P诱发自主活动兴奋中的作用

前言

1 材料与方法

2结果

3 讨论

4 结论

参考文献

文献综述:B[a]P的毒性作用及其在环境中的分布

致谢

攻读硕士期间发表的论文