SNAP-25通过调控Glu神经递质在B[a]P致神经毒作用机制的研究

摘要

第一部分：亚慢性B[a]P暴露对SD大鼠海马中SNAP-25及GluR的影响
　　目的：
　　通过建立苯并[a]芘（Benzo(a)pyrene,B[a]P）所诱导的动物神经毒性模型，观察其对SD大鼠海马组织中谷氨酸（glutamate,Glu）含量的改变及对突触小体相关蛋白（Synaptosome-associated proteinof25 kDa,SNAP-25）、谷氨酸受体（glutamate receptor,GluR）表达的影响，为揭示SNAP-25及Glu在B[a]P所致神经毒性中所扮演的重要作用提供理论依据。
　　方法：
　　80只雄性SD幼鼠，日龄5天，随机分为溶剂对照组、B[a]P低剂量组（0.02 mg/kg）、B[a]P中剂量组（0.2 mg/kg）和B[a]P高剂量组（2.0 mg/kg），按分组及其体质量连续灌胃处理7周，溶剂对照组给以等量花生油处理。染毒结束后采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力；采用1H-磁共振波谱法（1H-MRS）检测Glu在相关脑区的代谢参数；电镜观察海马组织神经元、突触及细胞超微结构等变化。分别于染毒1周及7周末，分离海马组织，并采用免疫组化法及Western-blot测定海马组织中SNAP-25及谷氨酸受体（glutamate receptor,GluR）的表达情况。
　　结果：
　　（1）当B[a]P处理35天后，B[a]P处理组老鼠体重较对照组明显下降，尤以0.2和2.0 mg/kg组下降明显，差异具有统计学意义[F(3,76)=3.881,P=0.008]；
　　（2）Morris水迷宫显示，B[a]P处理组较溶剂对照组逃避潜伏期及游泳距离增加，而跨平台次数及在目标象限停留时间显著减少；
　　（3）电镜结果示，B[a]P暴露组较溶剂对照组海马组织内质网和胞浆肿胀、扩大，形态不规则，海马组织中突触间隙明显增宽；
　　（4）1H-MRS结果显示，与对照组（0.996±0.236 ppm）相比，随着染毒浓度的增加，海马中Glu的含量呈下降趋势（各染毒组分别为0.722±0.185,0.687±0.172和0.583±0.154 ppm）；
　　（5）与溶剂对照组相比，B[a]P暴露1周及7周后，海马组织中GluR1及GluR2表达均明显降低，而SNAP-25表达增加。
　　结论：
　　B[a]P亚慢性暴露可引起新生幼鼠学习记忆能力缺陷，改变海马组织的超微结构，其可能的神经毒作用机制在于通过降低Glu水平而改变Glu的传输，降低GluR的表达，增强SNAP-25的表达。
　　第二部分：SNAP-25及GluR在B[a]P诱导神经毒作用机制的研究
　　目的：
　　探讨B[a]P对U87细胞活性及凋亡的影响，并通过观察改变SNAP-25蛋白的表达后其对GluR表达的影响。
　　方法：
　　采用MTT法观察B[a]P对U87细胞活性的影响；并通过AO-EB染色法、Hoechst33258染色法及annexinV-FITC/PI双染法进一步观察B[a]P对U87细胞的凋亡情况；B[a]P染毒后，采用Fluo-3 AM荧光探针检测细胞内[Ca2+]i含量；通过siRNA转染技术抑制SNAP-25蛋白的表达后，采用Western-blot及RT-PCR进一步观察其对GluR的影响。
　　结果：
　　（1）B[a]P染毒24 h后，U87细胞的细胞活性明显降低，呈明显的剂量-反应关系；
　　（2）AO-EB染色法、annexin V-FITC/PI双染法结果显示B[a]P暴露组较对照组细胞凋亡率明显增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）；Hoechst33258染色法显示，B[a]P暴露组部分细胞核固缩，染色质浓集，致密浓染，呈强蓝色荧光；
　　（3）流式细胞术示，U87细胞各细胞周期比例（G0/G1:56.04%±2.78%；G2/M:12.44%±2.71%；S:9.05%±0.79%）较对照组（G0/G1:56.44%±2.44%；G2/M:11.79%±3.66%；S:8.57%±0.36%）无明显改变；
　　（4）B[a]P可显著增加细胞内[Ca2+]i浓度；
　　（5）下调SNAP-25蛋白表达后，细胞内GluR1和GluR2在mRNA及蛋白水平较B[a]P处理组明显增加。
　　结论：
　　B[a]P可降低细胞活性、引起细胞凋亡。通过下调SNAP-25的表达，细胞内GluR水平增加，表明B[a]P的神经毒性作用至少部分归因于SNAP-25表达的改变，进而影响Glu神经递质传递。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

参 考 文 献

第一部分 亚慢性B[a]P暴露对SD大鼠海马中SNAP-25及GluR的影响

1实验材料与方法

2实验方法

3实验结果

4讨论

参 考 文 献

第二部分 SNAP-25及GluR在B[a]P诱导神经毒作用机制的研究

1实验仪器与试剂

2实验方法

3实验结果

4讨论

参 考 文 献

全文总结

文献综述:B[a]P神经毒性机制研究现状分析

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文