过表达miR-382的肿瘤相关巨噬细胞对三阴性乳腺癌生物学特性影响的研究

摘要

目的： 探讨MicroRNA-382(miR-382)在肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）中的表达对三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）细胞（4T1）生物学特性的影响。 方法： 慢病毒介导巨噬细胞（PMs）中miR-382的过表达，采用细胞免疫荧光和Real-time PCR（qRT-PCR）检测慢病毒转染率；三阴性乳腺癌条件培养基（triple negative breast cancer conditioned medium，TCM）刺激各组PMs后，Western blotting检测TAMs的极化指标（IL-10，TNF-α）、PGC-1α和NF-κB的蛋白表达变化；qRT-PCR检测miR-382和TAMs的极化指标（IL-10，TNF-α）与PGC-1α的核酸表达变化；流式细胞术检测TAMs的极化变化(CD86，CD206)和4T1细胞的凋亡率与细胞周期；Transwell侵袭实验检测4T1细胞的侵袭能力；激光共聚焦显微镜成像检测PGC-1α和NF-κB的表达变化； 结果： TCM刺激PMs后，TAMs呈M2型极化，TAMs中miR-382表达水平降低，PGC-1α表达水平增高以及NF-κB转录活性降低，4T1细胞侵袭能力增强、凋亡率下降；运用慢病毒使PMs过表达miR-382，在TCM的刺激下，TAMs呈M1型极化，TAMs中miR-382表达水平增高，PGC-1α表达水平降低以及NF-κB转录活性增强，4T1细胞的侵袭能力下降、凋亡率增高。结论TAMs可以通过调节miR-382的表达可抑制三阴性乳腺癌的侵袭和增殖，其机制可能与TAMs中miR-382抑制PGC-1α的表达、增强NF-κB的转录活性，进而抑制了TAMs的M2分化有关。 结论： TAMs可以通过调节miR-382的表达可抑制三阴性乳腺癌的侵袭和增殖，其机制可能与TAMs中miR-382抑制PGC-1α的表达、增强NF-κB的转录活性，进而抑制了TAMs的M2分化有关。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1.试剂与仪器

1.1主要试剂

1.2主要试剂的配置

1.3 主要仪器

2.方法

2.1 细胞培养

2.2 PMs的提取与培养

2.3慢病毒转染PMs细胞

2.4 TCM的提取及利用

2.5 Transwell共培养

2.6 实验分组

2.7 qRT-PCR实验

2.8流式细胞术分析PMs极化指标

2.9流式细胞术分析4T1细胞凋亡率与细胞周期分布

2.10 Transwell侵袭实验

2.11Western blotting实验

2.12激光共聚焦显微镜成像

2.13统计学分析

3. 结果

3.1慢病毒介导PMs过表达miR-382。

3.2过表达miR-382对TAMs极化的影响

3.3过表达miR-382的TAMs对4T1细胞生物特性的影响

3.4过表达miR-382的TAMs对PGC-1α的表达的影响

3.5 过表达miR-382的TAMs对NF-κB的转录活性的影响

4.讨论

结论

参考文献

文献综述:靶向肿瘤相关巨噬细胞的治疗研究进展

致谢

攻读硕士期间发表的论文