卡介苗接种异常反应的原发性免疫缺陷病筛查及慢性皮肤粘膜念珠菌病的临床与分子特征研究

摘要

第一部分卡介苗接种异常反应的原发性免疫缺陷病筛查 目的：总结31例卡介苗接种异常反应患儿的临床资料，疑似病例进行筛查试验并对结果异常的患儿进行基因分析，明确诊断。 方法：①总结31例有卡介苗接种异常反应患儿的临床资料和实验室结果。②流式细胞术检测31例患儿中性粒细胞呼吸爆发功能，3例患儿Th17细胞数量，Q-RT-PCR检测15例患儿IL-12/IFN-γ轴功能的完整性。③对筛查结果有异常的患儿进行相关基因分析并测序，明确病因。 结果：①一般情况：31例患儿，28例男性，3例女性，平均起病年龄4.1月，平均诊断年龄4.1岁。②临床表现：31例患儿在出生或出生后6m内接种卡介苗。其中21例出现局部强烈反应（接种部位红肿、化脓）,11例患儿有同侧颈部或腋下淋巴结肿大，9例患儿行淋巴结切除术。部分患儿出现播散性卡介苗感染的表现，包括多发骨质破坏（P4、P10），肺、骨、肝多发结核（P8-P12、P17、P18），结核性腹膜炎（P8），骨髓炎（P17）。③常规筛查：31例患儿血常规除P5、P9、P10外，其余28例白细胞均有升高。P1-P15免疫球蛋白IgG基本正常或代偿性增高；P16 IgE水平明显增高，为2000 IU/mL；P19 IgG水平低，IgE、IgA、IgM正常。P1-P15四唑氮蓝试验（NBT）明显降低，大多数为0。淋巴细胞分类均无明显异常。④免疫学功能试验：15例X连锁慢性肉芽肿病（X-CGD）患儿呼吸爆发结果异常，患儿有重叠峰，携带者母亲为双峰。1例高IgE综合征（HIES）及2例慢性皮肤粘膜念珠菌（CMC）患儿外周血PBMC中Th17细胞数量占CD4+T细胞的比例较健康对照减少。15例患儿行IL-12/IFN-γ轴功能试验，5例结果异常。⑤基因分析结果：15例患儿CYBB基因突变，1例患儿STAT3基因突变，1例患儿IFNGR1基因突变，1例患儿IL12RB1基因突变及2例患儿STAT1基因突变。 结论：本课题组筛查总结31例卡介苗接种异常反应的患儿，确诊包括X-CGD、HIES、孟德尔遗传异常分枝杆菌病（MSMD）、慢性皮肤粘膜念珠菌病（CMC）在内的20例原发性免疫缺陷病患儿。其卡介苗接种异常反应以局部强烈反应及淋巴结炎为主要表现，少数出现播散性卡介苗感染。通过筛查试验可为初步诊断这些PID提供依据，基因检测是诊断的金标准。 第二部分7例慢性皮肤粘膜念珠菌病的临床及分子特征分析 目的：探讨7例慢性皮肤粘膜念珠菌病（CMC）患儿的临床特征、Th17细胞数量及基因突变特征。 方法：①总结7例患儿临床资料，常规免疫学检查排除常见原发性免疫缺陷病。②流式细胞术检测患儿Th17细胞数量。③RT-PCR/PCR测序分析患儿及父母STAT1基因，明确诊断。 结果：①临床表现：患儿多在6月前起病，以反复鹅口疮起病，逐渐出现指甲及皮肤真菌感染。其中2例（P1，P5）出现深部真菌感染，表现为肺脓肿。1例（P4）有隐球菌感染。除真菌感染，同时经历反复上呼吸道感染、支气管炎、肺炎等，病原菌为金葡菌（P1、P4），肺炎链球菌（P1）和绿脓杆菌（P5）。2例（P6、P7）有分枝杆菌感染。2例（P5、P7）疱疹病毒感染，1例（P4）EB病毒，2例（P2、P3）巨细胞感染.。1例（P3）自身免疫表现，甲状旁腺功能降低。7例患儿均无严重并发症。②验室检查：7例患儿免疫学检查提示，淋巴细胞分类中，P2及P3 CD8+淋巴细胞稍高；P7 CD19+T细胞稍高而NK细胞稍低，其余均正常。血清免疫球蛋白P7血清IgG低，静脉输注免疫球蛋白后可恢复正常。NBT及呼吸爆发实验均正常。③7例患儿外周血PBMC中Th17细胞数量占CD4+T细胞的比例较健康对照明显减少。STAT1基因分析：发现6种突变位点（N89Y、L283V、M325K、Q330K、T385K、K388E）,其中4种（N89, L283V, M325K, Q330K）为新型突变。 结论：本研究确诊了7例STAT1突变CMC患者。自幼反复出现鹅口疮、有指甲、皮肤、消化道、外生殖器真菌感染的患儿应临床怀疑CMC。STAT1基因分析是诊断的金标准，突变STAT1基因可能通过改变Th17反应来影响宿主对念珠菌的防御，使Th17细胞测定成为快速筛查CMC的诊断工具。同时，CMC患者广泛的临床表型也提示我们，除长期的预防性抗真菌治疗外，其治疗仍需探索更多治疗策略。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

第一部分 卡介苗接种异常反应的原发性免疫缺陷病筛查

前言

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第二部分 7例慢性皮肤粘膜念珠菌病的临床及分子特征

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

全文总结

参考文献

文献综述:慢性皮肤粘膜念珠菌病的治疗策略探索

致谢

攻读硕士学位期间研究成果及发表论文