PKCβ/p66Shc介导氰酸盐诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤

摘要

目的： 探讨PKCβ/p66Shc通路在氰酸盐诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）氧化应激损伤和功能障碍中的作用及机制。 方法： 培养HUVECs，于倒置显微镜下观察细胞的形态，选用CCK-8法检测氰酸盐对HUVECs活力的影响；DCFH-DA法检测细胞内ROS含量；比色法检测NO、MDA含量和CAT、GSH-Px、SOD酶活性；IF法观察细胞内p-p66Shc、p-PKCβ、eNOS和ICAM-1的表达；Western blot检测细胞中p66Shc、p-p66Shc、PKCβ、p-PKCβ、ICAM-1和eNOS的蛋白水平。 结果： 浓度为1 mM的氰酸盐对HUVECs活力具有明显的抑制作用。与对照组和甘露醇组相比，氰酸盐组细胞内ROS含量明显升高。氰酸盐诱导内皮细胞中NO含量减少，CAT、GSH-Px、SOD酶活性降低，MDA含量增加。氰酸盐引起内皮细胞内p66Shc、p-p66Shc、PKCβ、p-PKCβ和ICAM-1蛋白水平明显上调；而eNOS水平下调。PKCβ抑制剂LY333531预处理后，细胞中ROS含量减少，NO含量增加，CAT、GSH-Px、SOD酶活性增加，MDA含量减少。p66Shc、p-p66Shc、PKCβ、p-PKCβ和ICAM-1蛋白水平较氰酸盐组下调，eNOS水平较氰酸盐组上调。 结论： 尿素水解产物氰酸盐通过激活PKCβ/p66Shc信号通路，诱导HUVECs内产生大量ROS，抑制CAT、SOD、GSH-Px的酶活性，减少NO的生成和eNOS的表达，增加MDA的含量和ICAM-1的表达，导致内皮细胞氧化应激损伤的发生和功能障碍。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

第一部分 氰酸盐诱导HUVECs氧化应激损伤和功能障碍

前言

1材料和方法

2结果

3讨论

第二部分 LY333531抑制氰酸盐诱导HUVECs氧化应激损伤

前言

1材料和方法

2 结果

3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述:蛋白质氨基甲酰化的研究现状

致谢

硕士期间发表的论文