细胞内HBV Precore蛋白与APOBEC3A的相互作用及对HBV复制的影响

摘要

目的： 研究细胞内乙型肝炎病毒(HBV)前C蛋白（Precore,包括P25、P22）与载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3A(APOBEC3A)是否存在相互作用及对HBV复制的影响。 方法： 构建P25、P22表达载体；HEK293T、HepG2细胞单独转染、共转染P25、P22、APOBEC3A表达载体；Western Blotting检测P25、P22、APOBEC3A蛋白表达；共聚焦显微镜检测P25、P22蛋白与 APOBEC3A蛋白共定位、免疫共沉淀检测 P25、P22蛋白与APOBEC3A蛋白的相互作用；建立HBV E抗原(HBeAg)缺失表达细胞模型；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转染细胞上清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和E抗原；Southern blotting检测转染细胞内HBV核心颗粒DNA。 结果： ⑴细胞转染P25、P22表达载体后检测到P25、P22蛋白表达，表明P25、P22表达载体构建成功。 ⑵共聚焦显微镜、免疫共沉淀检测到P25、P22蛋白与APOBEC3A蛋白共定位于胞质并存在相互作用。 ⑶在HBV E抗原缺失表达细胞模型中，与单独转染 P25、P22、APOBEC3A表达载体相比，共转染P25、P22与APOBEC3A表达载体将进一步降低了HBeAg和 HBsAg水平，同时也降低的了转染细胞内HBV复制中间体水平。 结论： 我们的研究证实了P25、P22蛋白与APOBEC3A蛋白存在相互作用并且这种相互作用影响了HBV的复制。这一结论对“细胞内HBV Precore蛋白通过与APOBEC3A的相互作用能否影响α干扰素的应答，是否是HBV复制和干扰素应答的重要调控机制”的后续研究做好了基础支持；也间接为抗HBV治疗中干扰素应答不良的机制研究及发展新型抗HBV药物提供依据。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分细胞内HBV Precore蛋白与APOBEC3A的相互作用

1材料与方法

2 结果

3 讨论

第二部分细胞内HBV Precore蛋白与APOBEC3A的相互作用对HBV复制的影响

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

参考文献

全文总结

文献综述:乙型肝炎病毒前C蛋白在病毒感染中的生物学功能研究

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文