载SDF-1α脂质纳米粒-声诺维®复合体的制备及特性研究

摘要

目的: 制备一种粒径为纳米级，分布均一，且能稳定缓释SDF-1α的脂质纳米粒（SDF-1αlipid nanoparticles，SNP）。将SNP和声诺维（SonoVue?）制备成一种兼具缓释作用和超声显像功能的载SDF-1α脂质纳米粒-声诺维复合体（SNP-SonoVue?）。检测其结构和生物活性，构建超声辐照持续稳定释药的给药模型，以实现局部的控释给药和体内药物示踪。 方法: SNP的制备。按10:4:3.5:3.5称取一定量的DPPC,DSPE， DPPG，DC-胆固醇制备SNP，采用微量滴加-冻干法制备带正电荷、油包水结构的纳米级SNP。马尔文粒径测量仪测量SNP的粒径大小和zeta电位，白光显微镜和透射电镜观察SNP的微观形态，ELISA测定SNP对SDF-1α的包封率。 SNP-SonoVue?的制备。构建SNP-SonoVue?，流式细胞术筛选构建SNP-SonoVue?的适宜比例。分别于1 h、2 h、4 h、8 h、24 h、40 h、80 h、144 h用ELISA测定SNP和LIFU辐照后SNP-SonoVue?在PH=7.4的PBS缓冲液中的缓释情况，绘制SNP和SNP-SonoVue?的释药曲线。荧光显微镜观察复合体中SonoVue?微泡对SNP的携带情况。 SNP-SonoVue?生物活性及体外显像的观察：将BMSCs用无血清培养基悬浮后，以2×105个/ml接种于Transwell小室膜上，根据下室培养基的组成分为6组。A组：SDF-1α+1％血清培养基；B组：SNP-SonoVue?+1％血清培养基；C组：LIFU辐照后SNP-SonoVue?+1％血清培养基(频率1MHz,声强0.5W/cm2，辐照时间为辐照30s停30s，作用4min)；D组：BNP-SonoVue?+1％血清培养基；E组：LIFU辐照后BNP-SonoVue?+1％血清培养基(频率1MHz,声强0.5W/cm2，辐照时间为辐照30s停30s，作用4min)； F组：PBS+1％血清培养基（对照组）。观察SNP、SNP-SonoVue?及LIFU辐照后SNP-SonoVue?的生物活性。制作琼脂糖凝胶模型，分别吸取1 ml SNP和1 ml SNP-SonoVue?置于制备好的琼脂糖模具中，观察其体外超声显影的情况。 结果： 1.制得的 SNP平均粒径为（220.4±9.9） nm,PDI为0.172±0.015，平均电位为（35.6±1.7）mV。普通显微镜下可见SNP大小均一，分散均匀。透射电镜下可见 SNP呈均匀分散的球形，无聚集成团现象,药物包封率为96.7％，载药量为481.76 ng/mg。 2.流式细胞术分析可见 SNP质量（mg）与SonoVue?微泡(个)的比值为20:（2.8×109）~40:（2.8×109）是 SNP-SonoVue?制备的适宜条件。荧光显微镜显示复合体中的SonoVue?微泡外壳有大量的 DiI标记的带红色荧光SNP。在药物缓释实验中，根据ELISA计算出药物释药率绘制出释药曲线，可见LIFU辐照后SNP及SNP-SonoVue?在7 d内SNP能以稳定的速度释药，药物释放率分别为（68.61±3.97）％和（63.21±5.68）％。两组之间的药物释放曲线的差异无统计学意义。 3.细胞迁移实验证实SDF-1α组和 SNP-SonoVue?组及LIFU辐照后SNP-SonoVue?组对BMSCs的迁移作用明显强于对照组，但SDF-1α组、SNP-SonoVue?组及LIFU辐照后SNP-SonoVue?组间无明显差异。体外显影实验可见SNP-SonoVue?复合体有明显增强显影作用。 结论： 本研究将缓释脂质纳米粒和超声微泡结合，成功制备了一种兼具缓释作用和超声显影作用的SNP-SonoVue?，通过超声辐照后可持续稳定释药，为水溶性药物及水溶性蛋白质的运载及定点控释提供了新思路和新手段。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分 载SDF-1α脂质纳米粒的制备和性质检测

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

第二部分 载SDF-1α脂质纳米粒-声诺维?复合体的制备及理化特性的研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

第三部分 载SDF-1α脂质纳米粒的生物活性及其增强显影的观察

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

全文总结

文献综述:超声造影剂的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间撰写的学术论文