受体介导的粘附粉末制备及其细胞粘附特性的初步研究

摘要

靶向给药系统(targetingdrugdeliverysystem，TDDS)是第四代药物输送系统。按靶向的源动力可以分为主动靶向制剂、被动靶向制剂、前体靶向药物。其中的主动靶向制剂是利用抗原—抗体或配体—受体等分子亲和作用将药物定向分布在靶组织或靶细胞内，研究对象以癌症为主。精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸—丝氨酸(Arg-Gly-Asp-Ser，RGDS)是各种基质蛋白质中最常见的基本构成成分，能够竞争性地与细胞表面的整合素受体结合，具有能定位于多种细胞粘附受体的能力以及对细胞固定、细胞性能和细胞存活率有生物影响的特性。 本论文的研究目的：利用RGDS配体与细胞表面的整合素受体之间的特异性粘附的性能，以生物相容性好的可生物降解的天然高分子材料—壳聚糖为载体，以甘草酸为模型药物，探究甘草酸缓释微球的制备工艺、工艺参数与微球成形的之间的关系。对优化的微球表面进行RGDS修饰及其与细胞的粘附性能的检测；并在此基础上考察了载药微球的体外释放规律，稳定性和微球的粉末特性的研究，为其应用提供理论与实验指导。获得的结论有以下几点： ①采用乳化交联技术制备甘草酸壳聚糖微球。通过单因素设计、均匀设计考察工艺参数与微球的性能之间的关系。利用统计学软件SPSS分析得到的多元线性回归方程如下：y=48.140-10.370X1-1.600E-02X3+28.364X4-29.196X5,r=0.915(粒径)；y=-22.761+30.454X1-2.697E-03X3+8.596X4-10.811X5,r=0.946(包封率)；y=0.277+0.350X1-2.013E-04X3+9.079E-02X4-0.162X5,r=0.953(载药量)。 ②利用吸附法对甘草酸壳聚糖微球进行RGDS修饰。由壳聚糖、甘草酸、壳聚糖微球、接枝RGDS微球的红外图谱可以说明微球的形成以及微球与RGDS接枝的完成。利用考马斯亮蓝染色法也验证了微球上RGDS的存在。 ③细胞水平实验，主要考察微球与细胞之间的粘附性能。扫描电镜照片显示在细胞表面空白微球几乎不存在，而在细胞表面有一个或多个RGDS微球存在。结果表明接枝RGDS的微球，具有RGDS的活性，与细胞之间有特异粘附的能力。 ④壳聚糖微球的稳定性及粉末特性实验结果表明：可用60Co辐射法对微球进行灭菌；在常温及4℃条件下其能够很好的保存；微球能满足可吸入粉末的要求。

目录

文摘

英文文摘

1绪论

1.1课题研究的目的意义

1.2国内外研究现状

1.2.1靶向药物输送系统的概述

1.2.2微球靶向制剂的研究进展

1.2.3 RGD序列的应用研究进展

1.3课题的提出、创新及研究内容

1.3.1课题的提出及创新

1.3.2课题研究内容

2理论基础

2.1肺部给药系统

2.1.1肺部的特点

2.1.2肺部给药的方式

2.2微球的制备技术

2.2.1微球的壁材

2.2.2壳聚糖微球制备技术

2.3药物在聚合物系统中的释放机理

2.3.1基本物理过程

2.3.2影响微球释药的因素

2.3.3微球的释药机制

3实验设计及分析方法

3.1实验设计流程

3.2壳聚糖及微球的理化性质的测定

3.2.1壳聚糖脱乙酰度的测定

3.2.2壳聚糖微球的形态及粒径的测定

3.2.3壳聚糖微球载药量和包封率的测定

3.2.4壳聚糖微球的稳定性

3.2.5壳聚糖微球的体外释放

3.3壳聚糖微球的粉末特性

3.3.1壳聚糖微球的流动性

3.3.2壳聚糖微球的透粘膜实验

3.3.3壳聚糖微球吸湿速率的测定

3.4微球表面接枝RGDS及检测方法

3.4.1微球表面接枝RGDS

3.4.2微球表面的RGDS检测

3.5接枝RGDS的微球体外靶向

3.5.1肝癌细胞(SMMC-7721)的复苏

3.5.2肝癌细胞(SMMC-7721)传代培养

3.5.3微球与细胞之间的粘附性能

4实验试剂及仪器

4.1实验试剂

4.2实验仪器

5实验结果及讨论

5.1壳聚糖的脱乙酰度实验结果

5.2单因素试验研究

5.2.1壳聚糖的浓度对微球成球的影响

5.2.2交联剂的量对成球的影响

5.2.3搅拌速度对微球成球的影响

5.2.4乳化剂的量对微球成球的影响

5.3均匀设计制备微球及工艺优化

5.3.1均匀设计因素及水平表

5.3.2均匀设计实验的结果及分析

5.4微球的稳定性实验结果及分析

5.5微球体外释放实验结果及分析

5.6微球的粉末性能的测定结果及分析

5.6.1微球流动性测定结果及分析

5.6.2微球透粘膜实验结果及分析

5.6.3微球吸湿速率的实验结果及分析

5.7微球接枝RGDS实验结果及分析

5.7.1考马斯亮蓝G-250染色结果及分析

5.7.2红外照射结果及分析

5.8微球体外靶向实验结果及分析

6结论

7工作展望

致 谢

参考文献

作者在攻读硕士学位期间发表的论文情况

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