一种新型小口径人工血管的制备——去内皮异种血管再内皮化的实验研究

摘要

目前，各种直径大小的血管移植物的需求日益增多。临床应用中，一般认为Dacron(涤纶)、ePTFE(聚四氟乙烯)等合成型血管在大口径血管移植中效果可靠，有肯定的远期通畅率。但是，在小口径血管(内径＜6mm)移植中，由于血管中高张力、低血流的特殊状态，导致了很高的移植失败率。小口径血管移植物的研究仍然面临很大困难：合成型血管由于吻合处易发生内膜增生和血栓形成，远期通畅率并不满意；自体血管由于来源有限，异体血管和异种血管由于易产生免疫排斥反应，临床应用也受到限制；组织工程化血管的制备工艺还不成熟。因此，构建一种良好的小口径血管移植物正成为人工血管研究的热点。本研究采用原代培养的兔动脉内皮细胞作为种子细胞，以超低温处理去除内皮细胞的大鼠颈动脉血管为血管基质，旋转加静态培养使其完成内皮化，然后进行植入兔股动脉的动物实验，为小口径血管移植材料的研究尝试新的思路，并探讨异种血管移植的免疫排斥及早期通畅率等问题。 本研究的主要内容和结论是： 1.采用改进的Ⅱ型胶原酶消化法获取兔动脉内皮细胞，进行原代及传代培养，并对细胞进行鉴定。光镜下观察，酶消化法分离、培养的原代兔动脉内皮细胞呈典型的“铺路石”状镶嵌排列，细胞为扁平多角形。透射电镜下可见培养细胞浆内Weibel-Palade小体。结果表明，培养的原代内皮细胞具有内皮细胞的正常特征，可以用于实验研究。 2.采用超低温处理去除Wistar大鼠颈总动脉(内径约1mm)的内皮细胞。H&E染色和扫描电镜观察的结果显示，采用超低温处理的Wistar大鼠颈动脉血管内皮细胞完全去除，处理后的血管其他组织保留完整。 3.原代培养至2-3代的兔动脉内皮细胞(RAECs)高密度(2×106cell/cm2)接种于去除内皮细胞的大鼠血管内腔面，旋转培养2h后，再在37℃，5％CO2条件下静态培养3-5天。AgNO3染色和扫描电镜下观察：将RAECs种植于超低温处理后的大鼠颈总动脉内腔面3-5天后，细胞完全覆盖血管内壁，融合成单层。 4.以正常异体兔股动脉(RAGs)组和去内皮Wistar大鼠颈动脉(DRAGs)组作为对照组，将重新内皮化Wistar大鼠颈动脉(RRAGs)植入兔股动脉，进行动物实验(每组六只)，检测组织病理学变化、内皮细胞覆盖情况及其早期的通畅率。通过扫描电镜和H&E染色切片观察：移植后1周，RRAGs组移植段内腔有大量内皮细胞，外膜少量淋巴细胞浸润，与RAGs组结果类似；而DRAGs组内腔弹力膜裸露，少量内皮细胞覆盖，外膜大量淋巴细胞浸润。移植后4周，RRAGs组移植段通畅，内腔基本被内皮细胞覆盖，细胞沿血流方向排列，与RAGs组类似；而DRAGs组血管移植段有大量血栓形成。RRAGs组和RAGs组的四周累计通畅率分别为66.7％和83.3％，而DRAGs组则只有50％。

目录

文摘

英文文摘

1绪论

1.1问题的提出及研究意义

1.2国内外研究现状

1.2.1小口径血管移植物

1.2.2血管移植物的内皮化

1.3本文研究的目的和研究内容

1.3.1本文的研究目的

1.3.2本研究的主要内容

1.3.3本研究的创新点

2兔动脉内皮细胞原代培养及鉴定

2.1前言

2.2兔动脉内皮细胞的分离培养及鉴定

2.2.1兔动脉内皮细胞的分离、培养

2.2.2兔动脉内皮细胞的形态学观察和生长状态检测

2.3讨论

2.4本章小结

3超低温冻存处理Wistar大鼠颈总动脉及其再内皮化研究

3.1前言

3.2超低温处理Wistar大鼠颈总动脉血管

3.2.1 Wistar大鼠颈总动脉血管的超低温冻存处理

3.2.2内皮细胞去除效果的鉴定

3.3原代兔动脉内皮细胞(RAECs)的接种及接种后的培养

3.3.1原代兔动脉内皮细胞(RAECs)的接种及接种后的培养

3.3.2去内皮细胞的大鼠颈动脉血管再内皮化结果

3.4讨论

3.5本章小结

4移植兔股动脉的动物实验研究

4.1前言

4.2实验方法

4.2.1移植实验

4.2.2通畅率的评估

4.2.3动脉吻合口及移植段病理学检查

4.3结果

4.3.1早期通畅率

4.3.2病理学观察

4.4讨论

4.5本章小结

5结论与展望

5.1主要结论

5.2展望

致 谢

6参考文献

附 录

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