丹参多酚酸注射液联合rt-PA早期干预对急性脑梗塞大鼠eNOS、sTM、sEPCR表达的影响

摘要

目的:急性缺血性脑卒中(AIS)是由于脑部组织缺血缺氧,神经功能缺损的致残率极高的急重症。AIS血管再通是目前临床中窗口期内脑梗死的首选治疗,其中静脉溶栓因其安全性以及适用性在临床上应用最为广泛,探究该治疗手段的生理病理机制,进一步提高临床疗效,改善患者预后,日趋成为医学界研究热点。血管再通后缺血再灌注、出血转化致使脑梗面积扩大甚至脑出血等并发症严重影响患者预后,因此在血管再通后早期内进行药物干预是极其必要的。目前,西医通常尚缺乏安全有效防治血管循环障碍的药物。中医药注射液因其可充分发挥未病先防、既病防变的中医特色优势,有着方便安全有效的闪光点,基本全面覆盖我国临床治疗AIS的方案。丹参多酚酸注射液是由丹参提取有效成分,可改善心脑血系统缓解缺血区再灌注损伤,临床上已经被广泛使用。本研究通过用建立同种异体血栓脑中动脉栓塞大鼠模型,以模型大鼠为研究对象,观察丹参多酚酸早期干预急性缺血性脑梗死大鼠对eNOS、sTM、sEPCR表达的影响,从血管内皮功能的保护作用角度,探讨丹参多酚酸注射液早期干预血管再通对脑动脉血管循环的影响,填补当前临床血管再通早期使用活血化瘀治疗研究的空缺,并为临床推广应用提供实验依据。方法:将120只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、溶栓组、丹参多酚酸组,共4组,每组30只。每组给予不同预处理。假手术组、模型组大鼠每日后予以氯化钠溶液尾静脉注射;溶栓组大鼠造模完成后4.5小时予尾静脉注入阿替普酶,2小时后及每日后予以等体积氯化钠溶液干预;丹参多酚酸组造模完成后4.5h静脉注入阿替普酶,2小时后及每日还序贯尾静脉注入丹参多酚酸组。造模及给药后,统计大鼠死亡率,于梗死后1d、3d、7d按要求观察各组大鼠是否存在神经缺损行为,取材前夜大鼠禁食不禁水,留取大脑组织进行TTC染色观察大脑梗死病变以及面积、HE染色观察脑部细胞情况、免疫组化检测各组eNO S、sTM、sEPCR蛋白表达水平。得出的数据利用统计学进行数据分析。结果:1.各组大鼠的总体死亡率:与假手术组相比,模型组、溶栓组的死亡率显著上升,溶栓+丹参多酚酸组的死亡率上升。2.各组大鼠神经功能缺损评分比较:造模1天:模型组、溶栓组、溶栓+丹参组的神经行为评分与假手术组评分相比均升高。造模3天:模型组、溶栓组、溶栓+丹参组的神经行为评分与假手术组评分相比均升高,溶栓组、溶栓+丹参组的神经行为评分与模型组评分相比均降低。造模7天:溶栓组、溶栓+丹参组的神经行为评分与模型组评分相比均升高,溶栓组神经行为评分与溶栓+丹参组的评分相比升高。3.各组大鼠TTC梗死体积比较:与模型组相比溶栓组大鼠和溶栓+丹参多酚酸组各个时间点的梗死面积降低;与溶栓组相比,溶栓+丹参多酚酸组的1d、3d的大鼠梗死面积降低。4.各组大鼠HE染色患侧海马区病理变化。假手术组的大鼠脑组织的神经元细胞形态规则,细胞核规整;模型组的大鼠脑组织神经元细胞形态肿胀,细胞核固缩;溶栓组的神经元细胞排列较规则,但神经元细胞核固缩较明显;丹参多酚酸+溶栓组神经元细胞排列更整齐,神经元细胞核基本正常,部分细胞水肿明显减轻。5.各种大鼠脑组织eNOS、sTM、sEPCR的表达:各组大鼠的血管内皮因子eNOS含量相较于模型组,溶栓组和溶栓+丹参多酚酸组各个时间段的eNOS含量均显著降低;较于溶栓组,溶栓+丹参多酚酸组各个时间段的eNOS含量表达无明显差异。各组大鼠的血管内皮因子sEPCR表达相较于模型组,溶栓组1天、3天时间段sEPCR的表达含量显著降低,7天时间段sEPCR的表达含量降低,溶栓+丹参多酚酸组各个时间段sEPCR的表达含量显著降低;较于溶栓组,7天时间段sEPCR的表达含量降低。各组大鼠的血管内皮因子sTM表达相较于模型组,溶栓组、溶栓+丹参多酚酸组各个时间段sTM的表达含量显著降低;较于溶栓组,溶栓+丹参多酚酸组7天时间段sTM的表达含量降低。结论:1.MCAO自体血栓模型大鼠脑组织中eNOS、sTM、sEPCR等因子含量的变化提示脑梗死以及脑梗死溶栓过程中可能存在血管内皮功能损伤;2.活血化瘀作用的注射用丹参多酚酸可降低sTM、sEPCR等因子含量的表达水平;早期干预脑梗死大鼠可降低血管内皮损伤因子表达水平;这可能是其对脑梗死以及溶栓中缺血再灌注损伤具有保护作用的机制之一。

目录

ABSTRACT

引言

第一部分 材料与方法

1 实验材料

1.1 实验动物

1.2 主要仪器和设备

1.3 主要试剂

2 实验方法

2.1 实验动物分组

2.2 自体血栓栓塞型大鼠模型制备

2.3 取材检测

2.4 统计学方法

第二部分 结果与分析

3. 结果与分析

3.1 各组大鼠死亡率比较

3.2 各组大鼠神经功能缺损评分比较

3.3 各组大鼠TTC梗死体积比较

3.4 各组大鼠HE染色患侧海马区病理变化

3.5 各种大鼠脑组织eNOS、sTM、sEPCR的表达

讨论

1. AIS的中西医认识

1.1 现代医学对AIS认识

1.2 中医对脑梗死(中风)的认识

2. 急性脑梗死及血管再通后对血管内皮细胞的影响

3. eNOS、sTM、sEPCR对血管内皮功能的意义

3.1 eNOS调节NO的表达促进血管新生

3.2 sTM调节凝血系统平衡

3.3 sEPCR调控血管炎症、抗氧化应激表达

4. 实验造模以及模型给药时间的选择依据

4.1 脑梗死模型的选择依据

4.2 溶栓时间的选择依据

5. MCAO大鼠静脉溶栓加用丹参多酚酸注射液干预后eNOS、sTM、sEPCR的表达变化以及疗效评估

结论

参考文献

综述 注射用丹参多酚酸治疗急性期缺血性脑卒中研究进展

参考文献