法舒地尔提高猪缺血诱导心脏死亡供者(DCD)心保存效果实验研究

摘要

背景：
　　来源于脑死亡供体(Donation from Brain death，DBD)的供心缺乏，严重制约了心脏移植的进一步发展。全球年心脏移植数量无显著增加，甚至有所下降。因此，国际上一致认为DCD是最具开发潜能的供者来源。心脏死亡供者（donors after cardiac death，DCD），在捐献之前不可逆的循环停止，心脏受损过多，包括缺血-再灌注(ischemia-reperfusion,I-R)损伤，甚至出现不可逆的心脏损伤（irreversible cardiac injury），导致移植器官早期失功（early poor graft function）。迄今为止，DCD心进行临床心脏移植，实际上只有零星报道。
　　Rho-激酶(ROCK)抑制剂“法舒地尔”（fasudil）在“抗缺血-再灌注”(ischemia-reperfusion,I-R)损伤方面，效果令人瞩目。实验证明，法舒地尔在兔供心保护和猪局限性心肌顿抑心肌保护发挥作用。将法舒地尔用于猪缺血诱导DCD心保存，效果及作用机制如何，尚不清楚，迄今尚未见报道。
　　目的：
　　实验旨在探讨Rho-激酶（ROCK）抑制剂“法舒地尔”对缺血诱导的DCD供心的保护效果及机制，为今后人类缺血诱导的DCD供心保护、开发利用提供实验依据。
　　材料和方法：
　　家猪16只，雄性，体重28±3Kg，随机分为实验组和对照组(每组n=8)：(一)实验组：缺血诱导供心停跳（血液回收至储血器中），停跳后继续热缺血（室温下静置）25min后阻断主动脉，经主动脉根部灌注含法舒地尔的Stanford（4℃）心肌保护液（20ml/Kg），心包腔置冰屑。灌注完毕后切取供心，将其固定在Langendorff离体心脏装置上，氧合温血持续灌注，进行心脏复跳、平衡；含法舒地尔的Stanford（4℃）液浸浴原位保存心脏2h；重新氧合温血（38℃）持续灌注，心脏复跳，观察1h结束实验；(二)对照组：整个实验过程中除不使用“法舒地尔”(用等量生理盐水代替法舒地尔)外，余步骤同实验组。在不同时点测定心脏血流动力学、冠脉流量、心肌酶、心肌梗死量、心肌组织含水量、观察心肌细胞凋亡、心肌光/电镜下结构改变。
　　结果：
　　两组所有供心均能正常复跳。（1）心脏血流动力学：供心在缺血前、平衡后，两组间血流动力学各项指标差异无统计学意义（p>0.05）；供心保存结束，复灌后30min、复灌后60min，LVEDP、LVPDP、±dp/dt有显著差异，实验组心功能的恢复，优于对照组，两组间差异有统计学意义（p<0.01）；（2）冠脉流量：缺血前、平衡后，两组间冠脉流量差异无统计学意义（p>0.05）；复灌后30min、复灌后60min，两组冠脉流量明显下降，实验组优于对照组，两组间差异有统计学意义（p<0.01）；（3）心肌酶：缺血前、平衡后，两组间差异无统计学意义（p＞0.05）；复灌后30 min、复灌后60min，两组均显著升高，实验组升高幅度低于对照组，两组间差异有统计学意义（p＜0.01）；（4）心肌组织含水量：实验组（77.9±0.8％）明显低于对照组（80.3±1.2%），两组间差异有统计学意义（p<0.01）；（5）心肌梗死量：两组心肌各切片标本，肉眼可见散在、局灶性分布的梗死病灶，实验组（16.0±0.2%）明显低于对照组（25.0±0.2%），两组间差异有统计学意义（p＜0.01)；（6）光镜下观察：实验组心肌细胞排列规则有序,胞质肌丝丰富；细胞核基本正常；对照组心肌细胞排列规则有序,胞质肌丝丰富，少部分细胞核固缩、裂解；（7）电镜下观察：实验组心肌细胞核呈梭形、长杆状、椭圆形，核膜清晰，常染色体呈细颗粒状，异染色体分布在核膜内侧，肌纤维排列有序，闰盘、Z带清晰可见，肌原纤维间有杆状线粒体、丰富糖原颗粒，线粒体均匀排列，见清晰的线粒体嵴和膜，两侧肌浆网可见 L小管；对照组细胞核椭圆形、不规则形，核膜清晰，肌纤维排列正常，闰盘、Z带欠清晰，线粒体轻度肿胀，部分嵴溶解，糖原颗粒减少；（8）心肌细胞的凋亡指数：TUNEL法检测心肌细胞的凋亡，实验组（22.2±0.8%）凋亡指数明显低于对照组（30.2±0.8%），两组差异有统计学意义（p＜0.01)。
　　结论：
　　（1）缺血诱导的猪DCD心，常温下缺血25分钟，体外灌注可以复苏，供心复率、复律、复力均满意；（2）法舒地尔添加到 Stanford液中作供心切心前灌注，以及添加到Stanford液供心冷浸浴保存，能减轻缺血诱导的猪DCD心I-R损伤，提高该类供心保存效果，有望在将来用于临床上DCD心保存。

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前 言

材料和方法

一、实验动物：

二、实验试剂

三、主要实验设备：

四、研究方法

五、监测指标

六、统计学处理

结 果

一、血流动力学指标变化

二、冠脉流量（CBF）

三、心肌酶

四、心肌含水量

五、心肌梗死量

六、心肌组织光镜

七、心肌电镜观察：

八、心肌细胞凋亡

讨 论

一、猪DCD心模型的探讨

二、法舒地尔对DCD供心的保护效果

结论

参考文献

附图：

综述

致谢

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