从生姜中筛选血清芳香酯酶激动剂组分

摘要

对氧磷酶（PON）是一种人体内重要的水解酶，其活性与心脑血管疾病、动脉粥样硬化、癌症、Ⅱ型糖尿病等多种疾病相关。生姜具有抗氧化、抗动脉粥样硬化、降低胆固醇、增强免疫功能、止吐等多种药理作用，常用于治疗心血管疾病，增加冠脉血流量的作用。因而从生姜中筛选出PON1激动剂组分对于上述一些疾病预防及治疗有着非常重要的研究和实际意义。
　　采用以9-（4-甲基苯氧羰基）-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸盐作为底物的化学发光法评价中，在粗提液浓度为5.00×10-6 g/L时血清空白组及生姜粗提液实验组的反应动力学速率常数K分别为0.0064 min-1、0.0119 min-1，激动倍数为1.86。采用以乙酰苯酚为底物的紫外分光光度法评价时发现生姜粗提液激动活性在浓度为4.00×10-5 g/L时达到最大。生姜粗提液能激动血清PON1催化吖啶酯水解两种评价方法的结论一致。
　　从生姜粗提液中依次萃取得到石油醚萃取液（PEE）、乙酸乙酯萃取液（EAE）、正丁醇萃取液（n-BE），化学发光法评价时发现三种萃取液浓度为8.00×10-5 g/L时都对血清PON1有激动作用，其速率常数分别为0.0099 min-1、0.0081 min-1、0.0068 min-1，激动作用的大小为：PEE＞EAE＞n-BE。采用紫外分光光度法评价时发现三种萃取液都对血清PON1有激动作用，且激动作用随着浓度的增大先增大后降低。在萃取液浓度为8.00×10-5 g/L时，激动作用的大小为：PEE＞EAE＞n-BE，该结果与化学发光法测定相符合。
　　采用柱层析和薄层层析从乙酸乙酯萃取液中首次分离得到2个混合物（样品1＃、样品2＃）和纯组分C（6-姜烯酚）、D、E（对香豆酸）、F（6-姜酚）。采用化学发光法评价时发现样品1＃对血清PON1呈抑制作用，抑制作用随着浓度的增大而增强。样品2＃对血清PON1有激动作用，激动作用随着浓度的增加先增加后减弱，在浓度为1.00×10-4 g/L时，激动作用最大，K=0.01519 min-1，激动倍数为2.44。因此对样品2＃进一步分离得到组分A和B（3-羟基-7-甲氧基黄酮）。由于组分A、D的量少，对其无法进行结构鉴定。
　　组分A、B、C对血清PON1有激动，激动作用都随着浓度的增大先增大后减弱，在各组分浓度为1.00×10-4 g/L、2.00×10-6 g/L、1.00×10-5 g/L时激动作用达到最大，K值分别为0.0131min-1、0.0104min-1、0.0205min-1，激动倍数分别为2.05、1.63、3.20，激动作用的大小为：组分C＞组分A＞组分B。组分D、E、F对血清PON1呈抑制作用，抑制作用随着浓度的增大而增强。
　　采用紫外分光光度法时发现组分A、B、C对血清PON1呈激动作用，三种组分的激动作用都随着浓度增大先增大后降低。在最佳的实验浓度下，激动活性的大小为：组分A（0.80×10-5 g/L，70.60 U/L）＞组分C（6.00×10-5 g/L，64.79 U/L）≈组分B（6.00×10-5 g/L，64.59 U/L）。
　　组分E、F对PON1呈抑制作用，在浓度小于4.00×10-4 g/L时，组分E的抑制作用大于组分F；在浓度大于4.00×10-4 g/L时，组分F对血清的抑制作用大于组分E。采用双倒数图判断组分E、F的抑制类型，发现组分E和F为竞争性抑制，平均抑制常数分别为8.98 mmol/L、9.13 mmol/L，抑制作用强度为：组分F＞组分E。
　　采用化学发光法评价从石油醚萃取液中得到的组分M及组分N，发现组分M对血清PON1有激动作用，随着组分浓度的增大激动作用增大，在浓度为1.0×10-4 g/L时，激动作用基本保持不变，K=0.0207 min-1，激动倍数为3.23。而组分N则对血清PON1呈现抑制作用，抑制作用也随着浓度的增大而增大。但由于后期保存不当，导致样品分解，因此对上述组分结构无法鉴定。

目录

1 绪 论

1.1 生姜

1.2 血清芳香酯酶（PON）

1.3 化学发光

1.4 本课题研究的目的及内容

2 生姜有效成分的提取及其对血清PON1的活性评价

2.1 引言

2.2 材料与试剂

2.3 实验方法

2.4 实验结果与讨论

2.5 本章小结

3初步分离及评价生姜粗提液中的有效成分

3.1 引言

3.2 仪器与试剂

3.3 生姜粗提液的初步分离

3.4 实验结果与讨论

3.5 本章小结

4 分离及评价乙酸乙酯萃取液中的有效成分

4.1 引言

4.2 仪器与试剂

4.3 实验方法

4.4 实验结果与讨论

4.5 本章小结

5 分离及评价石油醚和正丁醇萃取液中的有效成分

5.1 引言

5.2 仪器与试剂

5.3 实验方法

5.4 实验结果与讨论

5.5 本章小结

6 结论与展望

6.1 结论

6.2 展望

致谢

参考文献

附录

A 论文中名词的缩写

B 作者硕士研究生期间科研成果

C 化合物的 1HNMR及 13CNMR