钙调神经磷酸酶信号通路及负调控信号糖原合成酶激酶-3ß对大鼠经皮血管成形术后再狭窄作用及干扰研究

摘要

经皮冠状动脉血管成形术(PCTA)术是目前治疗冠状动脉粥样硬化所致缺血性心脏病的有效方法之一,但是单纯PTCA术后仍有很多患者出现手术局部的再狭窄。随着支架的出现,虽然显著降低了术后再狭窄,但再狭窄仍然存在,所以介入治疗后再狭窄病变仍是术后亟待解决的难题。大量文献表明,Ca2+/CaM-CaN-NFAT信号通路在再狭窄形成中的关键环节—炎症、血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMC)迁移及增殖中起重要作用,许多与再狭窄相关的炎症因子都是通过该信号通路介导起作用的。Ca2+/CaM-CaN-NFAT信号通路介导炎症过程,促发血小板黏附、血栓形成,还可释放多种生物活性物质刺激内皮、VSMC增殖及胶原增生。糖原合成酶激酶-3(Glycogen synthase 3,GSK-3)是典型的CaN-NFAT信号负调节途径,可使核内NFAT磷酸化,而再度回到胞浆并失去作用。他汀类药物(statins),即3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A(HMG2CoA)还原酶抑制剂,广泛用于冠心病的一级和二级预防。除降脂作用外,他汀类药物还具有抑制平滑肌细胞的迁移、增殖,改善血管内皮功能,抑制炎症反应,抑制血小板功能,抑制血栓形成,抑制新生血管形成,抑制氧化应激等功能,这些效应可作用于再狭窄许多病理环节。
　　研究目的:
　　本实验通过球囊损伤大鼠腹主动脉后致再狭窄模型中,研究Can-NFAT通路及GSK-3β信号分子的活化在术后再狭窄的作用及以及CaN特异性抑制剂环孢素A(Cyclosporin-A,CSA)和辛伐他汀(Simvastatin)对大鼠PTA术后术后再狭窄的影响的影响,为防治血管再狭窄提供新的理论依据。
　　方法:
　　雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组(O组)(n=12)、球囊组(P组)(n=12)、球囊损伤+环孢素组(C组)(n=12)、球囊损伤+辛伐他汀组(S组)(n=12)。环孢素组、辛伐他汀组大鼠行PTA术前3天开始分别每天灌喂CSA(12.5mg/kg.day)、辛伐他汀(20mg/kg.d),假手术组、球囊组大鼠灌喂等容积0.5％羧甲基纤维素钠。PTA术后28天取材,常规组织切片观察血管病理学改变,Realtime PCR(RT-PCR)法检测血管组织中GSK-3β、IL-2和活化T细胞核因子-1(NFATC1)的mRNA表达变化,western blot法检测钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)、活化T细胞核因子-1(NFATC1),GSK-3β,P-GSK-3β在血管壁中的蛋白表达水平。
　　结果:
　　PTA术后形成的新生内膜,内膜厚度不均。P组、C组、S组较O组内膜/中膜厚度明显增加(P<0.01),C组、S组较P组增生减低。球囊损伤组大鼠,损伤血管组织CaNmRNA、NFATc1mRNA、IL-2mRNA表达与对照组比较明显升高(P<0.05),药物组表达则较球囊组明显降低(P<0.05)。O组、P组、C组、S组GSK-3β表达无统计学差异(P>0.05)。Western blot法检测血管组织Can和NFATC1,GSK-3β,P-GSK-3β蛋白表达量:P组、C组、S组Can和NFATC1较O组表达上升,C组,S组较P组下降,GSK-3β表达各组无统计学差异,P组、C组、S组的P-GSK-3β蛋白表达量较O组升高,C组、S组的P-GSK-3β较P组减少。
　　结论:
　　1、CaN-NFATc信号通路在球囊损伤术后再狭窄形成的炎症过程中起作用。伴随Can-NFAT信号通路及其负调控信号GSK-3β途径的活化。
　　2、GSK-3β为CaN-NFATc信号通路负调控信号,可能参与抑制血管内膜增生。
　　3、辛伐他汀减轻球球囊损伤术后再狭窄,通过抑制CaN-NFATc信号通路减轻血管内膜炎症可能为其机制之一。

目录

封面

目录

英汉名词缩略语

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1.手术器械和主要仪器

2.主要试剂

3.试剂配方

4.实验方法

4.1动物分组

4..2饲养方法

4.3动物模型的建立

4.4腹主动脉超声

4.4取材

4.5 HE染色

4.6实时荧光定量（Rea1 time PCR）

4.7蛋白免疫印迹（Western Blot）

结果

1 大鼠腹主动脉血管超声

2 HE染色

3 PCR检测结果

4 Western blot检测结果：

讨论

结论：

参考文献

综述

致谢

声明