高氧环境下小肠SIgA、Occludin蛋白及肠道分泌片表达变化的研究

摘要

目的：
　　研究持续高氧环境下新生大鼠肠黏膜sIgA、肠道分泌片及occludin蛋白的表达变化,探讨在持续高氧环境下三者表达变化的意义及对肠道的影响,为进一步研究持续高氧环境下三者作用的分子生物学机制及相关靶向治疗奠定基础。
　　方法：
　　将80只足月新生Wistar大鼠随机分为高氧组(n=60)及空气对照组(n=20),将高氧组新生大鼠置于持续高氧环境下(氧浓度90％～95%)饲养,分别于第14d及第21d从高氧组和空气组各随机抽取出10只大鼠,处死开腹后取出中段小肠以PBS冲洗肠腔,至肠腔干净。小肠黏膜组织甲醛固定后HE染色观察小肠黏膜组织病理学改变。小肠黏膜组织置于OCT包埋液氮保存做冰冻切片,使用免疫荧光法分别检测SC、occludin蛋白表达。提取肠黏膜组织蛋白,使用Elisa直接检测法检测sIgA表达情况。提取黏膜组织蛋白,使用Western blotting方法检测occludin蛋白及肠道分泌片蛋白表达量的变化。
　　结果：
　　中段小肠组织病理切片做HE染色光镜下观察,可见出生14d和21d空气对照组大鼠肠绒毛完整,高氧组出生14d和21d大鼠小肠绒毛普遍较短,黏膜细胞部分脱落,多数黏膜细胞内有空泡形成,细胞外间质中存在不同数量炎症细胞浸润。Elisa方法检测高氧组及空气对照组14d及21d的sIgA含量提示差异均具有统计学意义(P<0.01),且高氧组sIgA含量较空气对照组高;免疫荧光及Western blotting法检测肠道分泌片提示高氧组与空气对照组14d及21d的差异有统计学意义(P<0.01),且高氧组较对照组高;高氧组occludin蛋白表达量较空气对照组比较相对有减少,但其差异无统计学意义(P>0.05)。
　　结论：
　　持续高氧作用下,新生大鼠肠道形态学改变,肠道黏膜损伤,新生大鼠肠黏膜分泌sIgA及肠道分泌片均增多,增强肠道抵御细菌、毒素的能力,提高肠道的免疫功能,以保持肠道黏膜屏障的完整性。SIgA及SC在应对肠道损伤中有相当重要的协同作用,两者相互补充,相互促进。高氧组肠道组织occludin蛋白的含量与空气对照组相对减少,但并无显著的统计学意义,其原因可能是高氧造成的肠道损伤机制与炎症性肠病的发病机制有所不同,也可能是sIgA及SC的分泌增加对肠黏膜屏障的保护作用使细胞间紧密连接的损伤程度明显减轻所致。

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英文缩略词

前 言

材料和方法

1 材料

1.1 实验动物

1.2 主要仪器和设备

1.3 主要实验材料

1.4 主要试剂

1.5 主要液体配置

2 实验方法

2.1实验动物分组

2.2 标本采集及检测方法

结 果

1实验动物一般状态

2小肠黏膜组织学观察

3免疫荧光法观察SC、Occludin蛋白表达

3.1空白对照组的采图

3.2 免疫荧光法观察SC表达

3.3 免疫荧光法观察Occludin蛋白表达

4 Elisa法检测小肠黏膜组织sIgA表达的变化

5 Western blotting法检测小肠黏膜组织SC、Occludin蛋白水平表达的变化

5.1 Western blotting检测小肠黏膜组织SC表达的变化

5.2 Western blotting法检测小肠黏膜组织Occludin蛋白表达的变化

讨 论

结 论

参考文献

文献综述

致谢

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