重组人促红细胞生成素对3日龄脑白质损伤新生大鼠神经保护作用的研究

摘要

背景:
　　随着围产医学的发展,早产儿存活率较前有了明显的提高,但早产儿脑损伤发生率未见下降,研究发现促红细胞生成素对早产儿脑损伤具有一定的神经保护作用。
　　目的:
　　1.早产儿脑白质损伤(White Matter Damage,WMD)动物模型的构建;
　　2.探讨重组人促红细胞生成素(Recombinant Human Erythropoietin,rhEPO)对3日龄WMD大鼠的神经保护作用。
　　方法:
　　新生3日龄(P3)SD大鼠120只随机分为对照组,WMD组和rhEPO治疗组,对照组仅分离左侧颈总动脉,不结扎、不缺氧,rhEPO治疗组大鼠结扎左侧颈总动脉,术后6％氧气+94%氮气混合气中缺氧2.5小时,WMD模型建立后立即按5000IU/kg腹腔注射一次rhEPO,WMD组大鼠造模方法同rhEPO治疗组,模型建立后腹腔注射等量的生理盐水,实验中测量三组大鼠不同时间点体质量变化,并于术后24h、生后7d、生后21d断头取脑,测量脑重量,石蜡包埋切片,行常规HE染色、MBP免疫组化,生后30d进行悬吊试验、斜坡试验及旷场试验等神经行为学检测试验。
　　结果:
　　1.WMD组和rhEPO组大鼠缺氧缺血后均出现行为异常改变,WMD组术后体质量增长明显落后于rhEPO组和对照组,差异有统计学意义[术后24h:(7.2±0.3)比(8.2±0.8)、(9.5±0.4),生后7d:(10.1±0.5)比(13.4±0.5)、(15.3±0.3),生后21d:(30.5±0.4)比(43.7±0.5)、(48.4±0.5),p均<0.05];
　　2.术后24小时对照组皮质白质分界清晰,细胞排列整齐,胼胝体细胞呈规则纤维状排列,WMD组皮质白质分界消失,细胞排列紊乱,可见核固缩,皮质下组织可见疏松改变,胼胝体细胞稀疏,rhEPO组核固缩及组织疏松情况较WMD明显减轻;生后21天WMD组胼胝体变薄,侧脑室明显扩大,rhEPO组侧脑室轻度扩大;
　　3.免疫组织化学:三组术后24h均未见MBP染色,生后7d对照组,rhEPO组胼胝体、皮质下白质可见一定程度的MBP染色,WMD组未见明显MBP染色,生后21d对照组,rhEPO组胼胝体、皮质下白质可见大量MBP染色,WMD组MBP染色明显减少;
　　4.神经行为学:WMD组大鼠玻璃棒悬吊时间明显短于rhEPO组和对照组;斜坡试验中WMD组大鼠转头时间明显长于rhEPO组和对照组,差异均具有统计学意义[悬吊试验(min):(1.8±0.4)比(3.8±0.4)、(4.0±0.2),斜坡试验(s):(9.3±0.8)比(4.4±0.7)、(3.8±0.5),p均<0.05];旷场及拒俘反应试验中WMD组大鼠的评分均明显低于rhEPO组和对照组,主要表现为行为迟缓,穿越方格数少及容易被抓取,很少回避及逃脱[旷场试验(分):(4.8±0.9)比(11.4±2.2)、(11.9±1.8),拒俘反应试验(分):(1.0±0.6)比(3.1±1.0)、(3.4±1.1),p均<0.05]。
　　结论:
　　1.3日龄SD大鼠单侧颈总动脉结扎+缺氧2.5h可成功构建WMD模型;
　　2.rhEPO可减轻WMD大鼠脑白质损伤,改善少突胶质细胞的成熟障碍及髓鞘发育延迟,促进神经生长修复,改善后期的神经行为表现。

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前言

1. 早产儿脑损伤及发病机制

2. EPO及其神经保护机制

3. EPO神经保护作用的相关研究

4. 开展本课题的设想

材料和方法

1. 材料

2. 方法

结果

1. 大鼠死亡情况

2. 大鼠造模后行为学改变

3. 大鼠不同时间体质量变化

4. 大鼠术后不同时间点脑重量变化

5. 脑组织病理形态学改变

讨论

1. 早产儿脑损伤动物模型的构建

2. rhEPO给药剂量及方式的选择

3. rhEPO的可能神经保护作用

4. rhEPO对WMD大鼠后期神经行为学的影响

结论

1. 3日龄SD大鼠单侧颈总动脉结扎+缺氧2.5h可成功构建WMD模型；

2. rhEPO可减轻WMD大鼠脑白质损伤，改善少突胶质细胞的成熟障碍及髓鞘发育延迟，促进神经生长修复，改善后期的神经行为表现。

参考文献

综述

在校期间发表的论文

致谢

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