基于结核分枝杆菌异柠檬酸裂合酶的高通量药物筛选模型的构建与应用

摘要

本文通过PCR方法获得ICL的编码序列，克隆至原核表达载体pQE30；将重组质粒pICL-pQE30转化大肠杆菌JM109，优化可溶性重组蛋白的表达，Nisepharose纯化可溶性重组蛋白。研究酶反应的线性范围以及反应时间，考察DMSO对ICL活力的影响，对测活条件进行优化，确定反应体系，并对高通量筛选模型进行评价。建立ICL抑制剂高通量筛选的标准化操作流程。对475个中药提取物进行筛选，初筛和双复孔复筛后，挑选抑制率大于＞50％的样品进行浓度梯度测定，计算IC50。结果显示重组ICL基因工程菌构建成功，纯化方案简单可行，得到的重组ICL纯度达到90％以上，酶活力达到25676U/L，模型参数S/N和Z因子的值分别为12.7和0.72，说明该模型适用于高通量筛选。在对475种中药提取物的筛选中，筛选得到两种对ICL有明显抑制作用的中药XHD-1和XHD-2提取物，其IC50分别为0.0477±0.0169和0.0182±0.0009mg/ml。对其进一步分离、纯化活性物质，可望获得抑制活性更强的重组结核分枝杆菌ICL的中药抑制剂，为抗结核药物的开发打下了良好的基础。

目录

文摘

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第一章综述 异柠檬酸裂合酶与高通量药物筛选

第二章前言

第三章实验材料和方法

第四章实验结果

第五章讨论

第六章结论及展望

参考文献

致谢