以DNA回旋酶为靶点的抗结核药物筛选模型的构建及高通量筛选模型的建立探索;以次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶为靶点的抗结核药物筛选模型的构建和应用研究

摘要

本论文包括两部分的工作。第一部分为探索构建以DNA回旋酶为靶点的抗结核药物高通量筛选模型研究。
　　 通过分子生物学方法，克隆DNA回旋酶A亚基基因（gyrA，Rv0006）和B亚基基因(gyrB，Rv0005)，构建高效表达重组结核杆菌H37Rv GyrA蛋白和GyrB蛋白的基因工程菌。通过Ni2+金属螯合层析的方法对表达产物进行纯化，获得了高纯度的重组结核杆菌GyrA蛋白和GyrB蛋白。利用获得的高纯度重组结核杆菌GyrA蛋白和GyrB蛋白建立DNA回旋酶活性测定反应体系，并在此基础上，探索构建了以DNA回旋酶为靶点的高通量抗结核药物筛选模型。
　　 本论文第二部分工作为，克隆结核杆菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶(IMPDH)关键编码基因guaB2，表达并纯化出具有体外活性的结核杆菌GuaB2蛋白，利用获得的高纯度重组GuaB2蛋白建立酶活测定反应体系，并在此基础上，构建了以IMPDH为靶点的高通量抗结核药物筛选模型。应用模型从9100个化合物中筛选得到了23个阳性化合物。

目录

声明

缩略语表

摘要

前言

实验材料

第一部分 以DNA回旋酶为靶点的抗结核药物筛选模型的构建及高通量筛选模型的建立探索

实验方法

实验结果

第二部分 以次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶为靶点的抗结核药物筛选模型的构建和应用研究

实验方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

综述

致谢

附录