灰毡毛忍冬中绿原酸的分离纯化及功能性研究

摘要

金银花为忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb，红腺忍冬LonicerahypoglaucaMiq，山银花，LoniceraConfusaDC，或毛花柱忍冬LoniceradasystylaRehd的干燥花蕾或带初开的花，是一种药食兼用植物资源，其有效活性成分为绿原酸，绿原酸是一种缩酚酸，属酚类化合物，是植物在有氧呼吸过程中，经莽草酸途径形成的一种苯丙素类化合物，具有抗菌、抗病毒、解热、升高白细胞、保肝利胆、免疫调节、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基等作用。 本试验旨在以重庆江津南部山区丰富的灰毡毛忍冬为原料，对灰毡毛忍冬籽的组成成分，灰毡毛忍冬中各部位总黄酮甙和绿原酸的含量，灰毡毛忍冬花中绿原酸的提取分离纯化及其花的提取物的功能特性进行了研究，确定了灰毡毛忍冬中绿原酸最佳提取和分离纯化的条件。主要研究结果如下： 1.分析了灰毡毛忍冬籽的营养成分、氨基酸组成、微量元素的含量以及金银花籽油的理化指标和脂肪酸组成。结果表明，金银花籽含25.82﹪的油，23.78﹪蛋白质，23.97﹪的糖类，13.84﹪的水分和6.95﹪的灰分；金银花籽蛋白质中氨基酸种类齐全；金银花籽油富含不饱和脂肪酸，含量高达85.28﹪。金银花籽油的理化指标为相对密度d4200.9158，折光指数n201.4796，皂化值180.31mgKOH/g，酸价2.55mgKOH/g。 2.采用传统索氏抽提法提取，分别测定灰毡毛忍冬的茎、叶、花、籽中绿原酸和总黄酮甙的含量，结果表明，灰毡毛忍冬茎、叶、花、籽中绿原酸的含量以花中为最高，达到了6.33﹪，叶和茎次之，分别为4.34﹪和3.47﹪，而在金银花籽中含量最少仅为0.34﹪。另外，灰毡毛忍冬茎、叶、花、籽中总黄酮甙的含量则以叶中总黄酮甙含量最高，达到35.64mg/g，籽和花次之，分别为29.51mg/g和17.40mg/g，而在金银花茎中含量最少，仅为10.50mg/g。 3.采用乙醇回流法研究了金银花中绿原酸的提取工艺。并采用紫外可见分光光度法确定了绿原酸的最大吸收波长为333nm；采用单因素和正交试验的方法，通过多重比较等统计手段，对影响绿原酸提取率的主要因素进行了分析，找出了从金银花中提取绿原酸的最佳工艺条件。结果表明：用紫外可见分光光度法测定金银花中的绿原酸含量，相对标准偏差较小，说明测定结果重现性好，精密度较高，所得数据精确。采用单因素和正交试验的方法，通过多重比较等统计手段，对影响绿原酸提取率的主要因素进行了分析，得到了从金银花中提取绿原酸的最佳工艺条件：原材料金银花，用70﹪乙醇，1：8的料液比在70℃提取4.5h，金银花粗提物得率为29.09﹪，其中绿原酸的含量达到了24.31﹪。 4.研究大孔树脂吸附纯化绿原酸的最佳工艺条件和参数。以绿原酸的纯度为考察指标，通过比较五种大孔树脂(D100、D101、D600、NKA-9，聚酰胺粉)对绿原酸的吸附和解吸附性能，得出聚酰胺粉的吸附和解吸附性能较好，吸附率为84.04﹪，50﹪乙醇洗脱解吸率为64.16﹪。绿原酸的最佳纯化工艺为：50﹪乙醇洗脱，pH3.0，流速1.0mL/min，其固形物得率为80.47﹪，绿原酸纯度达78.97﹪。 5.采用高效液相色谱法检测灰毡毛忍冬的主要功效成分—绿原酸，确定了其检测条件：HypersiLC1810gm，4.6mm×300mm色谱柱，LC-10AT泵，SPD-10A检测器，检测波长333nm，进样20μL，洗脱液为甲醇：1﹪磷酸水溶液=30：70，流速1.0mL/min，该条件下绿原酸的保留时间为4.452min。 6.研究了金银花提取物的抗氧化功能，结果表明金银花提取物中的绿原酸有比较强的清除O2的能力，且清除能力随着绿原酸含量的升高而增加。但绿原酸的清除超氧阴离子能力要比抗坏血酸的清除超氧阴离子的能力弱一些，最大清除率并没有超过50﹪。有较强的清除羟自由基的能力，且清除羟自由基的能力随绿原酸含量的升高而增强，清除羟自由基的能力要强于抗坏血酸。另外，金银花提取物中的绿原酸有较强的还原能力，吸光值随这绿原酸浓度的增加有显著的增加，是一种良好的抗氧化剂，而绿原酸的还原能力强于抗坏血酸。不仅如此，还研究了金银花提取物对亚硝胺合成的阻断作用和亚硝酸钠的消除作用，该活性提取物对亚硝胺合成最大阻断率为95.44﹪，对亚硝酸钠最大清除率为93.51﹪。结果表明，此提取物具有较高阻断亚硝胺合成及清除亚硝酸钠的效果。

目录

文摘

英文文摘

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第一章文献综述

第二章金银花籽组成成分的分析

第三章金银花中绿原酸提取工艺的研究

第四章聚酰胺粉对金银花中绿原酸的分离纯化研究

第五章金银花提取物的功能性试验

第六章结论与后续研究设想

参考文献

致谢

硕士期间发表的论文