三七及其有效成分抗内毒素致兔DIC症作用研究

摘要

三七为五加科多年生人参属植物三七Panax notoginseng(Burk)F.H.Chen的干燥根，是我国传统的活血类药物，其生品能够化瘀止血，消肿定痛，在临床上主要用于咯血、跌打肿痛、外伤出血等；而熟品则能补气和血，用于失血过多、贫血等。随着科技的不断发展，对三七的现代药理作用及其机制的研究也不断深入，发现三七除了具有上述作用外，还具有保护心肌、抗冠心病、抗炎、抗衰老、抗氧化、抗自由基损伤、抗内毒素等作用。为了能更充分的利用和开发中药三七的药用价值，本课题主要研究三七及其有效成分的提取、鉴定、制剂制备和抗内毒素致兔DIC症的作用。
　　 第一，分别通过优化正丁醇法提取三七素和丙酮-乙醚法提取三七总皂苷的提取工艺，得出最佳的提取流程。将提取的三七素、三七总皂苷和三七水煎液制备成注射液并进行质量研究。结果表明，三七素的最佳提取工艺为甲醇渗淋24h、甲醇量为800ml、饱和正丁醇萃取5次；三七总皂苷的最佳提取工艺为90％乙醇回流提取2次，每次90min，丙酮、乙醚比例1:1。三七素注射液为无色澄明液体，PH7.2，有效成分三七素含量为100mg/ml；三七总皂苷注射液为淡黄色澄明液体，PH7.4，三七总皂苷含量为100mg/ml；三七注射液为淡黄色澄明液体，PH为7.2，三七生药含量为1.0g/ml。
　　 第二，通过体外抑菌试验和抗内毒素试验结果表明，三七及其有效成分均有一定体外抑菌作用，三七和三七总皂苷具有体外抗内毒素作用，三七素在体外不具有抗内毒素作用。通过建立细菌内毒素致兔DIC症模型，用三七及其有效成分制剂进行治疗判定其疗效。试验结果显示，三七及三七总皂苷能有效改善内毒素引起的兔部分血液生理指标的改变，降低兔血浆中内毒素含量，增加抗凝血酶活性。能有效防治内毒素所致兔心血管的损伤，肌肉出血等，其中三七总皂苷注射液疗效最佳。
　　 第三，通过培养血管内皮细胞，传至第三代开始试验。测定三七及三七总皂苷对内毒素损伤的血管内皮细胞的细胞活力及内皮细胞中总蛋白含量、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)和组织因子(TF)活力。探讨三七及三七总皂苷可能的抗内毒素作用机制。试验结果表明，细菌内毒素能引起血管内皮细胞的损伤，导致总蛋白含量的减少，PAI-1蛋白和TF活性的显著增强；加入三七及三七总皂苷后，血管内皮细胞的细胞活力明显增加，总蛋白含量增多，PAI-1蛋白和TF活性降低，且药物对内皮细胞的作用呈剂量依赖关系。
　　 综上所述，三七有效成分三七总皂苷能抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的生长；明显降低血浆中内毒素含量、增加抗凝血酶活性，保护兔主动脉血管和肌肉；改善内毒素引起的家兔部分血象指标的变化，维持红细胞、白细胞和血小板数在一个正常范围内，降低PAI-1蛋白含量和TF活性，减少TF mRNA的表达，从而维持兔抗凝血与促凝血物质间的平衡，保护血管内皮细胞功能的稳定，达到防治内毒素致兔DIC症的目的。