RNAi剔降人蛋白激酶CK2α亚基的表达及其对人乳腺癌细胞MCF-7生长增殖影响的研究

摘要

本文以RNA干扰(RNAi)技术剔降人蛋白激酶CK2α亚基的表达，观察其对人乳腺癌细胞生长增殖抑制的效果，探讨肿瘤新的治疗策略研究根据人CK2α基因序列及二级结构特征，依据Tuschl等设计shRNA的原则，确定CK2α基因的干扰位点，以mU6provector质粒为载体，以定向克隆的方法构建针对人蛋白激酶CK2α亚基的重组shRNA表达质粒；电泳法初步筛选正确的重组克隆；DNA测序验证重组克隆插入序列的正确性；通过将重组质粒与绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-N1在脂质体LipofectamineTM2000介导下共转染的方法，荧光显微观察转染效果；MTT法观察RNAi作用对人乳腺癌细胞MCF-7生长增殖的影响，并筛选最有效的RNAi作用位点；流式细胞术检测RNAi对肿瘤细胞周期的影响及凋亡情况；MTT法及流式细胞术检测RNAi对肿瘤化疗药物紫杉醇抗癌作用的影响。

目录

学位论文独创性声明及知识产权声明

1前言

1.1研究背景

1.2研究目的

1.3研究内容

2针对人蛋白激酶CK2α亚基的shRNA表达质粒的构建与鉴定

2.1材料与方法

2.2结果

2.3讨论

3 shRNA表达质粒剔降人乳腺癌细胞MCF-7内蛋白激酶CK2α亚基的表达

3.1材料与方法

3.2结果

3.3讨论

4 RNAi剔降人蛋白激酶CK2α亚基后对人乳腺癌细胞MCF-7生长增殖的影响

4.1材料与方法

4.2结果

4.3讨论

5小结

参考文献

文献综述 RNAi实现策略的新进展

综述参考文献

致谢

附录一缩写词中英文对照

附录二测序结果图

附录三在读期间发表论文