猫爪草多糖免疫调节及抗氧化作用研究

摘要

[目的]
　　 从小毛莨的块根猫爪草中提取多糖,并研究猫爪草多糖(Polysaccharide ofRadix Ranunculi Temati,PRT)对正常小鼠和半贴壁巨噬细胞株ANA-1细胞免疫功能的影响,以及猫爪草多糖的抗氧化活性,探讨其在生物医药领域中应用的可能性,为进一步深入研究猫爪草多糖的抗炎、抗结核和抗肿瘤作用及其作用机理提供理论及实验依据。
　　 [方法]
　　 采用水提醇沉法提取和分离猫爪草多糖。红外光谱法测定猫爪草多糖分子结构;运用MTT法和中性红比色法检测小鼠脾脏淋巴细胞、胸腺细胞、腹腔巨噬细胞和ANA-1细胞增殖能力以及腹腔巨噬细胞吞噬功能。不同浓度的猫爪草多糖作用于ANA-1细胞以及LPS诱导的ANA-1细胞,采用Griess法检测NO生成量;一氧化氮合酶测定试剂盒检测iNOS活性;RT-PCR法检测iNOS、IL-6和TNF-α mRNA水平的表达;采用普鲁士兰法、水杨酸捕捉法和改良的临苯三酚自氧化法检测猫爪草多糖的还原能力、猫爪草多糖对.OH和O2·的清除能力。
　　 [结果]
　　 1.得到灰白色粉术状猫爪草多糖,多糖含量为98.17％。红外光谱显示猫爪草多糖的糖苷键为α-构型,具有吡喃型糖环。
　　 2.25μg/ml～400μg/ml猫爪草多糖能够增强小鼠脾脏淋巴细胞、胸腺细胞和ANA-1细胞增殖能力以及腹腔巨噬细胞吞噬功能,且呈剂量一效应关系。
　　 3.25μg/ml～400μg/ml猫爪草多糖能够增强小鼠腹腔巨噬细胞增殖能力,且200μg/ml猫爪草多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的增殖作用最强。
　　 4.猫爪草多糖抑制ANA-1细胞以及LPS诱导的ANA-1细胞分泌NO和iNOS活性,随着多糖浓度的增加,抑制能力逐渐增强。当多糖浓度为100μg/ml时,能够完全抑制iNOS在基因转录水平的表达。
　　 5.25μg/ml～400μg/ml猫爪草多糖能够增强ANA-1细胞相关细胞因子IL-6和TNF-α mRNA水平的表达,在多糖浓度为200μg/ml时,作用最强。
　　 6.2mg/ml～10 mg/ml猫爪草多糖在不同浓度梯度或体积梯度具有一定的还原能力,2mg/ml～8 mg/ml猫爪草多糖具有较强的清除.OH的能力,在多糖浓度为8mg/ml时,接近同浓度抗坏血酸对.OH的清除作用。100μg/ml～800μg/ml猫爪草多糖具有较强的清除O2·的能力,在多糖浓度为800μg/ml时,清除率达到95.39%。
　　 [结论]
　　 从小毛莨的块根猫爪草中成功分离得到具有免疫活性的猫爪草多糖,该多糖能够增强正常小鼠的免疫功能,且具有一定的还原能力以及较强的清除.OH和O2·的能力。不同浓度的猫爪草多糖能够增强ANA-1细胞增殖能力,并上调IL-6和TNF-α在基因转录水平的表达,抑制ANA-1细胞以及LPS诱导的ANA-1细胞分泌NO、iNOS活性和iNOS mRNA水平的表达。