大鼠肺组织血管内皮生长因子及内皮抑素的表达变化与肺发育的关系

摘要

[目的]
　　 肺泡和微血管的充分发育,使有氧呼吸过程中气体交换得以顺利进行,是肺发育的两个重要方面。血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)是血管生成促进因子,而血管内皮抑素(Endostmin,ES)是一种特异的血管内皮生长抑制因子。本研究拟以SD大鼠为研究对象,观察不同时问点胎鼠及新生大鼠肺组织的形态学变化,同时检测肺组织中VEGF及ES表达,旨在探讨肺组织中ES的表达变化与肺发育的关系以及ES与VEGF的相关关系,为下一步研究ES与早产儿肺疾病关系提供试验基础和理论依据。
　　 [方法]
　　 1.制备早产大鼠模型,于大鼠肺发育不同阶段即胚胎18天(GA18)、胚胎20天(GA20)、胚胎21天(GA21)及生后1天(P1)、4天(P4)、7天(P7)、14天(P14)及21(P21)天留取肺标本。
　　 2.显微镜下观察大鼠肺组织的形态学变化。
　　 3.采用qRT-PCR检测肺组织中VEGF及ES mRNA的表达。
　　 4.采用Western blot检测肿组织中VEGF及ES蛋白的表达。
　　 [结果]
　　 1.肺组织形态学变化:GA18肺发育处于假腺体期;GA20处于小管期;GA21及P1处于囊泡期;出生4天后处于肺泡期。
　　 2.qRT-PCR检测:大鼠肺发育过程中,生后肺组织VEGF mRNA表达水平较GA18明显增高,P21表达量最高;而ES mRNA表达水平出生前最低,P1～P4表达量逐渐增高,差异有统计学意义(P＜0.05);GA20～P14,VEGF mRNA呈持续稳定表达;P4～P21,ES mRNA持续在较稳定水平,差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 3.Western blot检测:大鼠肺发育过程中,GA18～GA20VEGF及ES蛋白呈持续稳定表达,差异无统计学意义(P＞0.05);VEGF蛋白表达量于GA21最低,而后逐渐升高,于P21达到最高水平;ES蛋白表达量于GA21最高,生后表达量降低,差异有统计学意义(p＜0.05);P4～P21,ES蛋白表达持续在一较稳定的水平,差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 4.VEGF与ES的相关关系:在大鼠肺发育过程中,VEGF及ES在mRNA及蛋白表达水平呈负相关。在mRNA表达水平,VEGF/ES比值出生前逐渐增高,生后逐渐降低,于生后7天呈增高趋势;在蛋白表达水平,VEGF/ES比值出生前最低,生后呈逐渐上升趋势。
　　 [结论]
　　 1.大鼠肺发育过程中,ES的蛋白表达量出生前最高,随着肺泡和毛细血管发育成熟,其表达量逐渐降低并于出生4天后持续在较低水平。
　　 2.VEGF的蛋白表达量随着肺泡和毛细血管发育成熟逐渐增高,VEGF与ES呈负相关。
　　 3.VEGF/ES比值生后逐渐升高,在正常肺发育过程中,以VEGF表达占主导地位,而ES的表达处于相对抑制状态。