南川百合组织培养与快繁技术研究

摘要

为了加快南川百合的繁殖速度,缩短其生育周期,从而保存南川百合优良的种质和性状,保护百合科生物多样性,本试验以南川百合(Lilium rosthornii Diels)的鳞片、叶片、茎段、花器官、不定芽叶片和再生小鳞茎的鳞片为外植体,接种在附加不同浓度及组合的6-BA、NAA的培养基中进行离体组织培养,研究了影响南川百合组培快繁的主要因子,重点探索了南川百合组织培养的最佳外植体材料、培养基种类和培养方法,以期获得南川百合组织培养的一套较为完整的再生体系。结果表明:
　　 1.以南川百合的鳞片、叶片、茎段、花器官、不定芽叶片和再生小鳞茎的鳞片作为外植体,结果表明:鳞片、叶片和茎段的污染率较高,出愈率低;花器官的子房和花托分生能力强,诱导分化率高,出芽数量多,诱导效果花托好于子房,花器官其它部位死亡率较高;不定芽的叶片和再生小鳞茎的鳞片没有被污染,数量多,基数较大,增殖速度快。因此花托、不定芽叶片和再生小鳞茎的鳞片为南川百合的最佳组织培养外植体。
　　 2.初代培养中,以实生苗鳞片为外植体,最佳诱导培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L(培养基中附加白砂糖30g/L,琼脂7g/L,下同)此时分化率为82.33%,分化系数为3.33;以实生苗茎段为外植体,最佳诱导培养基为MS+6-BA1.5mg/L斗.NAA1.0mg/L,此时分化率为58.67%,分化系数为3.19;以花托为外植体,最佳诱导培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L,此时分化率为93.33%,分化系数为3.4:以再生苗叶片为外植体,最佳诱导培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L,此时分化率为54.33%,芽分化系数为2.9;以再生小鳞茎的鳞片为外植体,最佳诱导培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L,此时分化率为100.00%,芽分化系数2.5。3.在增殖培养阶段,细胞分裂素对增殖系数作用明显,生长素对叶片的生长与分化有重要影响。增殖培养的最佳培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L,此时的增殖系数达到3.1,产生的愈伤组织比较多,且继续分化出不定芽的潜力大,形成的不定芽苗高均匀,球茎膨大也显著。
　　 4.低浓度的无机盐离子有利于南川百合的生根,本试验选用1/2MS培养基。NAA对南川百合生根的诱导效果要比IAA好,其应用的最佳浓度为0.5mg/L;最适宜南川百合生根的糖浓度为40g/L;对南川百合生根最佳的活性炭浓度为1.0g/L;10.0mg/L的多效唑可起到矮化壮苗的作用,生根率为86.67%,平均根数5.2,此时根系发达,叶片浓绿肥厚,为下一步不定芽移栽成活打下了基础。综合考虑影响生根的各项因素,得到南川百合生根的最佳培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L+10.0mg/LPP333+40g/L糖。
　　 5.培养基中糖浓度对南川百合球茎的膨大有一定的影响。本试验的研究结果表明,30～80g/L的糖浓度对小鳞茎的膨大有较好的作用,在此范围内小鳞茎的直径、重量会随着糖浓度的增大而增大。培养基中糖浓度(超过80g/L)较高时,得到的瓶苗生长状况不良,所以,80g/L糖浓度更有利于南川百合鳞茎的膨大。