小鼠免疫抑制模型筛选及球孢枝孢霉的小鼠致病性研究

摘要

[目的]
　　 1.筛选适用于真菌致病性研究的环磷酰胺(CTX)诱导免疫抑制小鼠模型。
　　 2.构建局部和系统性球孢枝孢霉感染小鼠模型，探讨球孢枝孢霉对小鼠的致病特点。
　　 [方法]
　　 1.环磷酰胺诱导小鼠免疫抑制模型筛选：BALB/c小鼠间隔2 d两次腹腔注射50-200 mg/kg CTX，在注射前后不同时间点采集静脉血，用全自动血细胞分析仪、三色法流式细胞术分别检测白细胞(WBC)、淋巴细胞(Ly)及其亚群变化。
　　 2.球孢枝孢霉的小鼠致病性研究：通过擦皮、皮下注射、静脉注射法给免疫正常、免疫抑制小鼠接种球孢枝孢霉，分别对皮损和内脏进行真菌逆培养、组织病理检查，并测定肺组织载菌量。
　　 [结果]
　　 1.环磷酰胺诱导小鼠免疫抑制模型筛选：
　　 各组小鼠WBC、Ly计数在首次注射CTX后1 d(T1)及4 d(T4)均有明显下降，其中T4时间点降低最明显，且剂量越大降低越明显；在第二次注射CTX后7 d(T7)明显回升；在第二次注射后14 d(T14)再次出现下降。各组小鼠外周血CD3+、CD3-CD19+、CD3-CD56+细胞百分率和CD4+/CD8+比值在T4时间点均有明显下降，其中CD3+、CD3-CD56+细胞百分率和CD4+/CD8+比值降至最低，且剂量越大降低越明显。CD3+、CD3-CD56+细胞百分率和CD4+/CD8+比值在T7H寸间点回升，而CD3-CD19+细胞百分率降至最低。
　　 2.球孢枝孢霉的小鼠致病性研究：
　　 (1)擦皮组：接种部位出现红肿、糜烂、结痂；免疫抑制组小鼠的皮损面积和真菌逆培养阳性率明显大于免疫正常组(54.40±16.26 vs8.85±2.53，P<0.01；90％vs40％，P<0.01)。
　　 (2)皮下注射组：接种部位出现结节、溃疡；免疫抑制组小鼠的皮损面积明显大于免疫正常组(33.45±7.53 vs6.70±1.89，P<0.01)。
　　 (3)静脉注射组：免疫抑制组小鼠的肺、脾、肝、肾、心真菌逆培养阳性率分别为90％、65％、60％、50％、20％，而正常免疫组分别为40％、25％、25％、15％、5％，两组的差异有统计学意义(P<0.01-0.05)。免疫抑制组小鼠肺组织载菌量明显大于免疫正常组(39.20±16.02 vs9.15±9.50)(P<0.01)。
　　 [结论]
　　 1.间隔2天两次腹腔注射CTX150 mg/kg可诱导BALB/c小鼠出现明显的免疫抑制，此模型可作为条件性致病真菌感染的易感模型。
　　 2.擦皮和皮下注射法接种球孢枝孢霉可建立BALB/c小鼠皮肤感染模型，而静脉注射法可建立小鼠系统性感染模型。
　　 3.球孢枝孢霉致病力与宿主免疫状态有关。免疫抑制小鼠对球孢枝孢霉易感，且感染程度较重。