采用钠离子荧光探针检测钠离子通道类毒素细胞毒性的方法研究

摘要

[目的]
　　 随着人们对钠离子通道类毒素危害的深入了解，人们希望能找到某种敏感、快速的检测方法，以减少对人类的危害以及经济上的损失。其中雪卡毒素中毒是目前世界上报道最多的食源性生物毒素中毒性疾病之一。在本研究中，研究和建立Na+荧光探针检测雪卡毒素的方法，为快速、敏感地检测雪卡毒素提供科学的实验依据。同时，将此方法应用到麻痹性贝毒(Paralytic ShellfishPoisoning，PSP)和神经性贝毒(Neurotoxic Shellfish Poisoning，NSP)的检测，建立一种适用于钠离子通道类毒素的检测方法。
　　 [方法]
　　 (1)本研究拟在现有的细胞毒性实验基础上优化实验条件，结合Na+/K+泵抑制剂乌本苷和钠离子通道激活剂藜芦定共同作用细胞，通过Na+荧光探针CoroNaTM Green标记正常细胞和不同浓度梯度的毒素标准品处理的细胞，利用多功能全自动酶标仪检测不同浓度梯度的毒素与荧光强度之间的关系，建立Na+荧光探针法。(2)通过小鼠生物法、免疫试剂盒法、细胞毒性试验法、高效液相色谱一质谱法以及Na+荧光探针法检测同一批样品，并比较结果。(3)将建立的Na+荧光探针法检测PSP和NSP，并与ELISA法的检测结果相比较。
　　 [结果]
　　 (1)建立了Na+荧光探针法，该法的最低检出限为10pg/L，与高效液相色谱-质谱联用法相当，最佳毒素检测范围为10pg/L～105pg/L。同时，细胞处理时间比细胞毒性实验CCK-8法提前了6h。(2)建立的Na+荧光探针法应用到PSP和NSP的检测，其检测结果与ELISA法的结果相比较，检出率相差不大。
　　 [结论]
　　 建立的Na+荧光探针法能快速、敏感地检测雪卡毒素，值得作为雪卡毒素检测初筛方法的推广应用。同时，此方法可为PSP和NSP的检测提供参考。