重庆地区水产品中副溶血性弧菌的污染情况调查和分离株的毒力因素及药物敏感性研究

摘要

副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus，VP)，隶属弧菌科，是一种嗜盐性人畜共患病原菌，可引起腹泻、肠痉挛、呕吐和发烧等典型胃肠炎反应以及败血症甚至死亡等，近年来随着生食半生食水产品消费量迅速增多，食品中副溶血性弧菌的潜在危险性也越来越大。由于不同来源的副溶血性弧菌毒力差异较大，有些菌株致病性很强，而有些菌株致病性较弱，了解不同来源的副溶血性弧菌毒力基因的携带情况，结合血清学分型和耐药性研究分析水产品中的副溶血性弧菌与临床分离株的相关性，为对水产品中副溶血性弧菌进行风险性评估和开展食品安全性检测研究提供理论依据。
　　 本文从超市、农贸市场、饭店（酒店）、集体食堂等采集的鱼类、虾类、贝类、头族类、蟹类、螺类等6类水产品食品样品，共323份，进行副溶血性弧菌的分离与鉴定。以副溶血性弧菌相关毒力基因(tdh、trh)设计引物，检测35株食品分离株与14株临床分离株的毒力基因携带率，并进行药敏试验，分析毒力基因携带率与抗药性的相关性，建立PCR技术鉴别副溶血性弧菌毒性的方法。
　　 实验结果:水产品中副溶血性弧菌的检出率为10.84％，总检出率相比其他地区偏低。在6类食品样品中，虾类中副溶血性弧菌的检出率最高，为17.58％，其次是鱼类和蟹类，检出率分别为14.18％、10.00％;螺类中未检出。35株食品分离株tdh基因携带率为14.29％，trh基因携带率为2.86％，血清凝集共分出8个血清群，主要集中在O3、O5、O1血清群;14株临床分离株tdh基因携带率为71.43％，trh基因携带率为14.29％，血清凝集共分出4个血清群，主要集中在O3、O4血清群。两种不同来源的副溶血性弧菌都对氨苄西林均有极强的耐药性;对头孢噻肟、环丙沙星、诺氟沙星敏感;其中对阿米卡星和链霉素的耐药性趋于中性。本研究可得出如下结论:
　　 1、CHROMagar显色培养基在疑似菌的检出概率以及总的检出概率方面，都是最优的;TCBS培养基不利于区分副溶血性弧菌与拟态弧菌、创伤弧菌等海洋弧菌。
　　 2、鱼、虾、蟹、贝等水产品极易受到副溶血性弧菌的污染，此结果说明某市存在发生副溶血性弧菌食物中毒的潜在危险。
　　 3、食品分离株与临床分离株的毒力基因携带率具有显著性差异，但是两种不同来源的副溶血性弧菌的耐药谱基本一致;携带tdh毒力基因的菌株，其血清型主要集中在O3群和O1群。
　　 建议:鉴于目前状况，有待于构建副溶血性弧菌致病性研究体系，进一步确定毒力性状与抗药性、血清型的相关性，为副溶血性弧菌食物中毒的监控、暴发流行的检测以及追踪污染源提供依据。

目录

声明

摘要

第1章 文献综述

1．1 生物学特性

1．2 食品中副溶血性弧菌的分布及风险评估

1．2．1 食品中副溶血性弧菌的分布

1．2．2 食品中副溶血性弧菌的风险评估

1．3 副溶血性弧菌的致病性及其致病因子

1．3．1 溶血毒素

1．3．2 尿素酶

1．3．3 黏附因子

1．3．4 侵袭力

1．3．5 铁获取系统

1．4 分离鉴定方法

1．4．1 传统鉴定方法

1．4．2 KP溶血试验

1．4．3 血清学检测

1．4．4 分子生物学检测

1．4．5 生物传感器(immuno-sensor)

1．4．6 全自动微生物生化鉴定系统

1．4．7 基因分型

1．4．8 其他方法

1．5 抗药性测定

第2章 引言

2．1 立题背景及意义

2．2 研究内容及研究路线

2．2．1 研究内容

2．2．2 研究路线

第3章 材料和方法

3．1 试验材料

3．1．1 菌株

3．1．2 样品

3．1．3 培养基和试剂

3．1．4 主要仪器设备

3．2 试验方法

3．2．1 样品采集

3．2．2 分离纯化

3．2．3 副溶血性弧菌毒力基因鉴定

3．2．4 血清学实验

3．2．5 抗药性试验

第4章 结果与分析

4．1 副溶血性弧菌在食品中的分布

4．1．1 副溶血性弧菌的分离鉴定

4．1．2 副溶血性弧菌在食品中的分布状况

4．1．3 不同食品样品中副溶血性弧菌的污染情况

4．1．4 不同采样地点副溶血性弧菌的检出情况

4．2 副溶血性弧菌毒力基因鉴定结果

4．2．1 tdh的PCR鉴定(扩增片段长度为269bp)

4．2．2 trh的PCR鉴定(扩增片段长度为500bp)

4．2．3 临床副溶血性弧菌毒力基因鉴定结果

4．3 副溶血性弧菌血清学分型结果

4．4 药敏试验结果

第5章 讨论

5．1 不同显色培养基对副溶血性弧菌检出率的影响

5．2 食品中副溶血性弧菌的风险评估

5．3 副溶血性弧菌的毒力基因

5．4 副溶血性弧菌的抗药性

第6章 结论

参考文献

致谢

研究生期间发表论文情况