高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术在药物测定中的研究与应用

摘要

共振瑞利散射技术是自1993年发展起来的一种快速、简便、灵敏的分析技术。在此后二十多年中，共振瑞利散射技术逐渐运用于无机元素分析、药物分析、生化分析、纳米材料等领域。高效液相色谱具有高选择性和高效快速分离，并可同时用于物质检查和含量测定的特点，已成为药物研究的有力工具。近年来，自从高效液相色谱仪与共振瑞利散射联用技术的优点被发现，它作为一种新型的联用技术，已经成功应用于蛋白质，氨基酸及药物的分析研究。本文建立了一种无柱后衍生试剂的HPLC-RRS联用技术，及三元离子缔合物的HPLC-RRS联用体系，不仅提高了方法的稳定性，还进一步扩大了RRS的应用范围。此外，本文在前人的基础上进一步改进了HPLC-RRS联用装置，使用匹配的流通池、控制反应管长、反应温度等，这对提高联用方法的灵敏度具有重要意义。本研究主要内容包括：
　　⑴高效液相色谱与共振瑞利散射联用测定三种α1受体阻滞剂。建立了一种共振瑞利散射与非柱后衍生高效液相色谱联用分离和检测三种α1受体阻滞剂的新方法。其定量分析法是基于添加适量有机溶剂甲醇使分子聚集，在聚集体与水之间由于表面增强效应而产生疏水作用力而使共振瑞利散射信号增强。三种α1受体阻滞剂在Gemini5u C18反相柱上(250 mm×4.6 mm;4μm)得到很好分离，流动相为甲醇和乙酸铵-甲酸(25 mM; pH=3.0)缓冲溶液，流速0.7 mLmin-1。它们的共振瑞利散射信号检测波长为λex=λem=354 nm。三种药的检测限为0.065-0.70μg L-1，三种药的RRS信号强度与药物浓度在一定范围内成良好的线性关系，它们的线性范围如下:甲磺酸多沙唑嗪0.75-15μg L-1，盐酸哌唑嗪0.075-3.0μg L-1，盐酸特拉唑嗪0.25-5μg L-1。
　　⑵高效液相色谱与共振瑞利散射联用测定巯嘌呤的方法及机理研究。建立了基于巯嘌呤与金属钯离子反应形成金属螯合物产生的共振瑞利散射信号与高效色谱联用测定巯嘌呤的新方法。该方法具有仪器简单，灵敏度高，选择性好的特点。优化了色谱分离条件，以腺嘌呤为内标物质，巯嘌呤在反相色谱柱(250mm×4.6mm;4μm)，柱温30℃，甲醇∶水=25∶75(V/V)的流动相，流速0.3 mLmin-1条件下得到很好的分离。共振瑞利散射信号的检测波长在λex=λem=315 nm处。优化了联用分析方法的参数，巯嘌呤在0.0615到2.40μg mL-1的浓度范围内呈良好的线性关系，在信噪比为3时检测限为0.019μgmL-1。该法用于测定人体尿样中巯嘌呤的含量，并得到了满意结果。此外，本文用红外光谱、化学计算，吸收光谱及场发射扫描电镜讨论了螯合反应的机理。
　　⑶高效液相色谱与共振瑞利散射联用测定第三代头孢类抗生素。建立一种基于三元离子缔合物产生的共振瑞利散射与高效液相色谱联用同时分离和检测第三代头孢类抗生素的方法。该法具有简便、灵敏度高、选择性好等优点。本文用甲醇:30mM的磷酸缓冲溶液(pH=3.5)=82∶18流动相(V/V)通过等度洗脱方法分离头孢他啶、头孢曲松钠、头孢哌酮、头孢噻肟钠四种抗生素。共振瑞利散射信号的检测波长在λex=λem=295 nm处。头孢他啶、头孢曲松钠、头孢哌酮、头孢噻肟钠的标准曲线均在良好的线性范围内，检测限分别为0.694，0.685，2.81和0.699 ng mL-1。此外，通过标准加入法测定人体尿样中第三代头孢类抗生素，它们在人体尿样中的加标回收率为在97.4％到101.3％之间，实验结果令人满意。

目录

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摘要

第一章 绪论

1 共振瑞利散射简要概述

2 高效液相色谱法发展简介

3 高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术的研究进展

4 高效液相色谱与共振瑞利散射联用装置概述

5 展望

第二章 高效液相色谱与共振瑞利散射联用测定三种α1受体阻滞剂

1 引言

2 实验部分

2．1 实验器材

2．2 化学用品及试剂

2．3 标准溶液的准备

2．4 样品前处理

2．5 SEM样品的制备

3 结果与讨论

3．1 RRS信号的优化

3．2 色谱条件的优化

3．3 方法验证

3．4 RRS信号增强的原因探讨

4 结论

第三章 高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术测定巯嘌呤的方法及机理探讨

1 前言

2 实验部分

2．1 实验器材

2．2 实验试剂及材料

2．3 试剂配置

2．4 样品前处理

2．5 红外光谱样品的制备

2．6 HPLC-RRS联用装置

3 结果与讨论

3．1 RRS条件的优化

3．2 HPLC条件的优化

3．3 分析方法的应用

3．4 方法的选择性

3．5 配合反应机理及RRS信号增强的原因

4 结论

第四章 高效液相色谱与共振瑞利散射联用测定生物复杂样品中的头孢类抗生素

1 引言

2 实验部分

2．1 仪器

2．2 试剂及材料

2．3 标准溶液的配制

2．4 样品前处理

2．5 SEM样品的制备

2．6 HPLC-RRS系统装置

3 结果与讨论

3．1 RRS条件的优化

3．2 HPLC条件的优化

3．3 分析方法的线性范围及检测限

3．4 分析方法在人体尿样中的应用

3．5 钯Pd(Ⅱ)-头孢类抗生素和二溴荧光素的相互作用的机理讨论

3．6 共振瑞利散射信号增强的主要原因

4 结论

参考文献

硕士期间发表论文

致谢