EGCG全酰化衍生物体外降解及对环磷酰胺引起的肝毒性的保护作用

摘要

表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）是一种主要存在于茶叶中的多酚类化合物，具有抗氧化、清除自由基、抗炎、抗菌、抗光学损伤、抗肿瘤、抗HIV、调节代谢综合症、预防心血管疾病、预防神经退行性病变等多种生理活性。但是由于其脂溶性及稳定性差，生物利用度低等缺点，使其使用受到限制。近年来，国内外开展了EGCG改性的相关研究，以期改善EGCG的应用特性。
　　本研究制备了一系列EGCG酰化衍生物（全乙酰化EGCG、全丙酰化EGCG、全丁酰化EGCG、全己酰化EGCG、全辛酰化EGCG、全癸酰化EGCG和全苯甲酰化EGCG），主要对全乙酰化EGCG、全丙酰化EGCG和全丁酰化EGCG在人工模拟胃肠液中的稳定性、在小鼠肝微粒体中的降解及它们对环磷酰胺引起的肝损伤的保护作用做了研究，具体内容如下：
　　（1）全酰化EGCG衍生物制备本研究以酸酐或酰氯为酰化试剂，以N，N-二甲氨基吡啶（DMAP）或吡啶为催化剂，TLC监测反应程度。反应完全后，依次用蒸馏水、饱和NaHCO3溶液、蒸馏水洗涤，所得有机层用无水MgSO4干燥，旋蒸除去溶剂。所得粗产物采用硅胶柱层析法进行分离，得到一系列高纯度的全酰化的产物。合成的产物通过MS、1H NMR、13C NMR等手段确认为相应的衍生物。
　　（2）EGCG酰化衍生物的稳定性及降解特性本研究对EGCG及全乙酰化、全丙酰化、全丁酰化的EGCG在人工模拟胃肠液中的稳定性进行了对比，和这三种酰化衍生物在小鼠肝微粒体中的降解特性做了研究。采用HPLC法测定这三种衍生物在模拟胃肠液和微粒体体外代谢系统中的含量，比较EGCG及其三种衍生物在模拟胃肠液的稳定性，利用底物消除法计算这三种衍生物的酶促动力学参数Km和Vmax。结果表明，在人工模拟胃液中，EGCG及其衍生物均能保持一定的稳定性；在人工模拟肠液中，EGCG迅速发生变化，在本实验条件下几乎检测不到。三种衍生物的稳定性相比于EGCG明显提高，稳定性由强到弱依次为BuEGCG>PrEGCG>AcEGCG。EGCG三种全酰化衍生物在小鼠肝微粒体中的降解实验表明，AcEGCG的Km=0.2098mmol·L-1、Vmax=4.7484μmol·min-1·mg-1；PrEGCG的Km=0.2155mmol·L-1、Vmax=3.3546μmol·min-1·mg-1；BuEGCG的Km=0.3303mmol·L-1、Vmax=0.5063μmol·min-1·mg-1。随着酰基碳链的延长，降解速度逐渐减慢，肝内清除率逐渐降低。
　　（3）对环磷酰胺引起的肝毒性的保护作用本研究采用环磷酰胺对昆明小鼠造模，引起肝脏损伤，观察EGCG及其全乙酰化、全丙酰化、全丁酰化的衍生物对环磷酰胺引起的肝毒性的保护作用。实验设置对照组、环磷酰胺组、EGCG及其衍生物(AcEGCG、PrEGCG、BuEGCG)低、高剂量组，第1-9天灌胃给予药物，第10天（除对照组外）腹腔注射环磷酰胺。采用全自动生化分析仪测定小鼠血清生化酶（AST、ALT、LDH）指标，采用试剂盒测定肝脏组织匀浆中的MDA、GSH量和SOD、CAT、GSH-PX活性，并观察肝脏组织病理学变化。结果表明，与环磷酰胺组比较，EGCG的高剂量、三种衍生物的低、高剂量组小鼠血清中AST、ALT、LDH活性明显下降，组织中SOD、CAT、GSH-PX活性升高，MDA含量下降，GSH含量升高。环磷酰胺组小鼠肝脏出现变性坏死、凋亡及炎性细胞浸润等病理变化，而EGCG及其三种衍生物的低、高剂量组大鼠肝脏病理变化不同程度减轻。EGCG及其衍生物对环磷酰胺致小鼠肝脏毒性具有一定保护作用。
　　结论：EGCG经酰化修饰后，在人工模拟胃肠液中的稳定性提高，肝内清除率降低，降低首过效应，有助于提高口服生物利用度。对EGCG及其三种衍生物的对环磷酰胺引起的肝毒性的保护作用研究发现，EGCG酰化衍生物的肝保护作用相比EGCG增强。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

第1章 绪论

1.1 EGCG简介

1.2 EGCG的药理作用

1.3 EGCG应用缺陷

1.4 EGCG酰化修饰及酰化产物活性

1.5立题背景及意义

1.6研究内容

第2章 全酰化EGCG的合成

2.1实验材料与仪器

2.2 EGCG酰基化反应

2.3实验方法与结果

2.4讨论与小结

第3章 全酰化EGCG的稳定性及降解研究

3.1实验材料与仪器

3.2试剂配制

3.3方法与结果

3.4 讨论与小结

第4章EGCG及其衍生物对环磷酰胺引起的小鼠肝毒性的保护作用

4.1实验材料与仪器

4.2实验方法

4.3结果

4.4讨论

第5章 总结与展望

5.1总结

5.2展望

参考文献

致谢

硕士研究生期间发表的学术论文

附录