骨髓间充质干细胞条件培养基对地塞米松预处理MC3T3-E1细胞内脂质蓄积和成骨能力的影响

摘要

目的： 1.探讨地塞米松对MC3T3-E1细胞成骨能力、脂质合成的影响，及二者是否存在关联。 2、探讨骨髓间充质干细胞的旁分泌作用对地塞米松诱导后的MC3T3-E1细胞内脂质合成及成骨能力的改变作用。 方法： 本试验以MC3T3-E1细胞为研究对象，制备、收集小鼠骨髓间充质干细胞条件培养基。将MC3T3-E1细胞分为A、B、C、D四组，处理方案： A组:对照组，B组:地塞米松1μmol/L，C组:地塞米松1μmol/L+小鼠骨髓间充质干细胞条件培养基(1:1)，D组:小鼠骨髓间充质干细胞条件培养基。干预24h后测定细胞内甘油三酯含量，做细胞NileRed染色,RT-PCR及westonblot检测SREBP1、SREBP2、HMGCR、FASP、PPARγ脂质相关标志；同时检测 RUNX2、Osteocalcin、COL1A1、ALP基因表达，以及ALP含量测定及钙结节染色。 结果： 1.地塞米松作用24h后MC3T3-E1细胞内甘油三酯含量较对照组明显增加（P＜0.05），NileRed染色增强（P＜0.05），细胞内SREBP1、SREBP2、HMGCR、FAS基因表达升高（P＜0.05），SREBP1、HMGCR、FAS蛋白水平表达升高（P＜0.05）；细胞内ALP降低（P＜0.05），而COL1A1、RUNX2、ALP、osteocalcin表达下降（P＜0.05）。 2.骨髓间充质干细胞条件培养基作用地塞米松预处理的MC3T3-E1细胞后，细胞内甘油三酯含量较处理前显著下降（P＜0.05），NileRed染色减弱（P＜0.05），SREBP1、SREBP2、HMGCR、FAS基因表达降低（P＜0.05）；钙结节增多，细胞内ALP含量增加（P＜0.05），RUNX2、ALP、osteocalcin表达增加（P＜0.05）。 3.地塞米松和骨髓间充质干细胞条件培养基处理前后的成骨细胞内的 PPARγ表达无明显差异（P＞0.05）。 结论： 1.大剂量的地塞米松抑制成骨细胞成骨功能，促进细胞内脂质异常蓄积。 2.骨髓间充质干细胞的条件培养基能抑制成骨细胞内脂质异常蓄积，改善受损的成骨功能。 3.地塞米松所致的成骨细胞内的脂质蓄积可能与成骨细胞脂肪分化无重要关联。

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1 前言

1.1 研究背景

1.2 研究目的

1.3 研究内容

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3统计分析

3 结果

3.1.不同浓度地塞米松对MC3T3-E1增殖的影响

3.2地塞米松及骨髓间充质干细胞条件培养作用24h后细胞内甘油三酯含量测定

3.3 地塞米松及骨髓间充质干细胞条件培养基作用24h后细胞NileRed染色

3.4地塞米松及骨髓间充质干细胞条件培养基作用24h后成骨细胞内脂质合成的相关蛋白和基因的表达

3.5 地塞米松及骨髓间充质干细胞条件培养基作用钙结节染色

3.6地塞米松及骨髓间充质干细胞条件培养基作用24h后成骨细胞内碱性磷酸酶的变化

3.7 地塞米松及骨髓间充质干细胞条件培养基作用24h后成骨细胞内成骨的相关蛋白和基因的表达

3.8 地塞米松及骨髓间充质干细胞条件培养基作用24h后成骨细胞内PARPγ蛋白和基因的表达

4 讨论

5 小结

参考文献

综述:糖皮质激素对成骨细胞的影响的研究进展

致谢

附录一：缩写词中英文对照

附录二：在读期间的科研情况